Ở ngoài buồng nuôi cấy, thực hiện ba bước sau:
Hình 8. Rửa bề mặt dây rốn bằng dung dịch muối Ringer
• Đặt chai dung dịch muối Ringer 0,9% trong Water bath ở 37o C. • Dây rốn được ngâm trong dung dịch tẩy rửa 1–2 phút.
• Rửa sạch bề mặt dây rốn bằng dung dịch muối Ringer từ 2–3 lần (Hình 8). • Xác định vị trí tĩnh mạch. Sử dụng kim tiêm bướm để bơm 30–50ml dung
dịch muối Ringer 0,9% vào mặt trong của tĩnh mạch. Từ các bước sau, thực hiện trong buồng cấy vô trùng:
• Phủ đĩa nuôi cấy bằng 1 lớp gelatin
• Rửa lại mặt trong của tĩnh mạch dây rốn 2 lần bằng PBS.
• Pha dung dịch collagenase 0,1% vừa đủ với lượng dây rốn thu được. • Bơm dung dịch collagenase 0,1% vào tĩnh mạch dây rốn (Hình 8).
Hình 9. Bơm Collagenase vào trong tĩnh mạch dây rốn
• Đặt dây rốn vào cốc đong có chứa dung dịch Ringer đã chuẩn bị trước đó trong bể ổn nhiệt. Ủ dây rốn trong dung dịch Ringer ở 37oC trong 15 phút
Hình 10. Ủ dây rốn trong dung dịch Ringer ở 370C
Hình 11. Mát – xa dây rốn
• Sau đó, thu lấy phần dung dịch collagenase (có chứa tế bào bị bong ra). Li tâm ở 1200g trong vòng 10 phút.
• Loại bỏ dịch nổi sau đó huyền phù hóa tế bào ở đáy ống Falcon.
• Chuyển dịch huyền phù tế bào vào trong các đĩa nuôi cấy 35mm đã được phủ gelatin.
• Thêm môi trường nuôi cấy tế bào cho đủ 2,5ml môi trường ở mỗi đĩa nuôi cấy.
• Nuôi cấy tế bào trong tủ ấm 37oC có 5%CO2, độ ẩm 95%