4.1 .Kết quả nuôi cấy, phânlập vi khuẩnSalmonella
4.4.1 .Kết quả tách chiết RNA tổng sốcủa chủngSalmonella đa kháng phânlập được
4.4.2. Kết quả RT-PCR phát hiện gen kháng kháng sinh của chủngSalmonella đa kháng
Salmonella đa kháng
2chủng Salmonella G1, G7 (nguồn gốc thịt gà) và 2 chủng L2, L5 (nguồngốc thịt lợn) sau khi tách chiết RNA tổng số được sử dụng để tổng hợp cDNA làm khuôn mẫu cho phản ứng RT-PCR sử dụng các cặp mồi cho gen mã hóa kháng tetracyclines (tet), chloramphenicol (cml), chloramphenicol acetyltransferase (cat), phenicol (floR) và gen đối chứng 16S rRNA.
Kết quả RT – PCR cho thấy, chủng Salmonella đa kháng G7 và L5 đều không mang gen tetB mã hóa kháng tetracycline (hình 4.11).
Hình 4.11. Kết quả RT – PCR phát hiện sự có mặt của gen tetB mã hóa
kháng tetracycline của chủng Salmonella đa kháng
M: thang chuẩn (DNA 1Kb)
1: G1, 2: G7, 3: L2, 4: L5, 5: đối chứng âm
Tiến hành thí nghiệm RT-PCR với chủng Salmonella đa kháng G7 (nguồn gốc thịt gà, sử dụng các cặp mồi tương ứng với các gen tetC, tetD, tetE, tetG mã hóa kháng tetracyclines, cat-2, cmlA, cmlB mã hóa kháng chloramphenicol,
floRmã hóa kháng phenicol.
Kết quả hình 4.12 cho thấy: sản phẩm PCR ở giếng số 8 có một băng DNA có kích thướctương đương với kích thước lý thuyết của gen floR (1212 bp).
Hình 4.12. Kết quả RT - PCR phát hiện gen floR mã hóa kháng phenicol
của chủng Salmonella đa kháng nguồn gốc từ gà G7
M: thang chuẩn (DNA 1Kb)
1 – 8: cặp mồi theo từng gen (1 -tetC, 2-tetD, 3-tetE, 4-tetG, 5-cat2, 6-
cmlA, 7-cmlB, 8-floR)
Tiếp tục thí nghiệm RT-PCR sử dụng các cặp mồi tương ứng các gen tetB,
tetC, tetD, tetE, tetG mã hóa kháng tetracyclines, cat-2,cmlA,cmlB mã hóa kháng chloramphenicol và DNA của chủng L5 (nguồn gốc thịt lợn) làm khuôn. Kết quả hình 4.13 phát hiện gen cmlAcó kích thước 682 bp.
Hình 4.13. Kết quả RT – PCR phát hiện gen cmlA mã hóa kháng
chloramphenicol của chủng Salmonella đa kháng nguồn gốc từ lợn L5
M: thang chuẩn (DNA 1Kb)
1 – 8: cặp mồi theo từng gen (1 - tetB, 2 - tetC, 3 - tetD, 4 - tetE, 5 - tetG, 6 –
Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cho thấy chủng Salmonella đa kháng kháng sinh phân lập được có chung kiểu hình kháng tetracyclines với kiểu gen
tetA, không mang kiểu gen tetB, tetC, tetD, tetE, tetG, chung kiểu hình kháng chloramphenicol với kiểu gen cat-1, cmlA, không mang kiểu gen cat-2, cmlB và chung kiểu hình kháng phenicol với kiểu gen floR.
Kết quả nghiên cứu bước đầu của chúng tôi cũng tương đương với một số nghiên cứu những năm gần đây. Theo Chen et al. (2004), các gen tetA và/ hoặc
tetB mã hóa kháng tetracycline đã được phát hiện trong mỗi chủng phân lập. Một trong hai hoặc cả hai gen cat-1, cat-2mã hóa cho enzyme chloramphenicol acetyltransferase kháng chloramphenicolđược phát hiện tồn tại trong những chủng Salmonella nguồn gốc từ Trung Quốc, trong khi gen floR kháng chloramphenicol lại được phát hiện trong mỗi chủng Salmonella phân lập từ Hoa Kỳ. Gen tetA, cmlA, floR cũng được tìm thấy trong các chủng vi khuẩn
Salmonella kháng kháng sinh phân lập từ cửa hàng thịt tại các chợ miền Bắc Việt
Nam (Trương Hà Thái và cs., 2012).