Từ kết quả hỡnh 3.3 cho thấy: sau 35 ngày nuụi cấy callus thụng đỏ đạt khối lượng cao nhất. Như vậy chu kỳ nuụi cấy tế bào thụng đỏ là 35 ngày.
3.1.1.5. Ảnh hưởng của cỏc chất kớch thớch sinh trưởng
* Ảnh hưởng của loại chất kớch thớch sinh trưởng
Lựa chọn 4 chất kớch thớch sinh trưởng thuộc 2 nhúm: auxin (2,4-D và NAA nồng độ 1 mg/l) và cytokinin (kinetin, BAP nồng độ lần lượt là 0,1 mg/l
(ngày) (mg)
và 0,5 mg/l) phối hợp với nhau và được thờm vào mụi trường B5, nuụi cấy trong thời gian 35 ngày. Kết quả được trỡnh bày ở bảng 3.6.
Bảng 3.6. Ảnh hưởng của loại chất kớch thớch sinh trưởng tới sự phỏt triển
của callus
STT Lụ nghiờn cứu sốc mấy ẫu callus (mg) Khối lượng p
1 2,4-D + kinetin 50 17,8 ± 1,4 P3-1<0,05
2 2,4-D + BAP 50 19,8 ± 2,7 P3-2<0,05
3 NAA + kinetin 50 24,8 ± 2,5 *
4 NAA + BAP 50 21,2 ± 1,8 P3-4<0,05
Trong 4 cặp chất kớch thớch sinh trưởng sử dụng trong nuụi cấy tế bào thụng đỏ thỡ cặp phối hợp giữa NAA và kinetin cho tốc độ phỏt triển của tế bào cao hơn so với 3 cặp cũn lại (p<0,05).
* Ảnh hưởng của nồng độ NAA
Sau khi đó lựa chọn được cặp chất kớch thớch sinh trưởng là NAA và kinetin sử dụng cho nuụi cấy tạo callus thụng đỏ, tiến hành khảo sỏt ảnh hưởng của nồng độ NAA tới tốc độ phỏt triển của tế bào. Tiến hành nuụi cấy callus thụng đỏ trong mụi trường B5 bổ sung kinetin nồng độ 0,1 mg/l phối hợp với NAA ở cỏc nồng độ 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 mg/l nuụi cấy trong 35 ngày. Kết quả trỡnh bày ở bảng 3.7.
Bảng 3.7. Ảnh hưởng của nồng độ NAA tới sự phỏt triển callus
STT Nồng độ NAA (mg/l) số mẫu cấy Khối lượng callus (mg) p 1 0,5 50 23,6 ± 2,1 P4-1< 0,05 2 1,0 50 24,1 ± 2.3 P4-2< 0,05 3 1,5 50 25,0 ± 1,8 p4-3< 0,05 4 2,0 50 26,8 ± 1,9 * 5 2,5 50 25,6 ± 1,7 p4-5 > 0,05
Kết quả bảng 3.6 cho thấy: khi tăng nồng độ NAA tốc độ phỏt triển của tế bào càng tăng và đạt khối lượng lớn nhất ở nồng độ 2,0 mg/l, với p<0,05. Tuy nhiờn, nếu tiếp tục tăng nồng độ NAA tới 2,5 mg/l thỡ khối lượng tế bào
tăng khụng đỏng kể (p>0,05). Như vậy, nồng độ NAA phự hợp cho nuụi cấy tạo callus là 2,0 mg/l.
* Ảnh hưởng của nồng độ kinetin
Nuụi cấy tạo callus trong mụi trường B5 cú bổ sung NAA (2,0 mg/l) và kết hợp kinetin với cỏc mức nồng độ khỏc nhau từ 0,1 đến 0,5 mg/l. Kết quả sau 35 ngày nuụi cấy được thể hiện trong bảng 3.8.
Bảng 3.8. Ảnh hưởng của nồng độ kinetin tới sự phỏt triển callus
STT Nồng độ kinetin (mg/l) số mẫu cấy Khối lượng callus (mg) p 1 0,1 50 24,5 ± 1,8 p1-2 <0,05 2 0,2 50 27,9 ± 2,3 * 3 0,3 50 26,1 ± 1,9 p2-3 >0,05 4 0,4 50 25,9 ± 2,4 p2-4 >0,05 5 0,5 50 26,2 ± 2,2 p2-5 >0,05
Khi nồng độ kinetin từ 0,3 đến 0,5 mg/l thỡ khối lượng callus sau 35 ngày nuụi cấy thay đổi khụng đỏng kể (p>0,05) so với mẫu nuụi khi dựng nồng độ 0,2 mg/l. Như vậy, nồng độ kinetin phự hợp cho nuụi cấy tạo callus là 0,2 mg/l.
3.1.2. Duy trỡ nuụi cấy callus thụng đỏ trong mụi trường thạch
Sau khi callus đó tạo trong mụi trường thạch mềm, cỏc tế bào cũn cứng và tiếp tục biệt húa thành cỏc cơ quan tổ chức khỏc như thõn, rễ… Vỡ vậy, cần cú giai đoạn duy trỡ nuụi cấy trong mụi trường thạch trong một thời gian nhất định, đảm bảo tế bào khụng cũn biệt húa, ngoài ra tế bào phải cú hỡnh thỏi mềm, xốp thớch hợp cho việc nuụi cấy trong mụi trường lỏng.
3.1.2.1. Ảnh hưởng của mụi trường và số lần cấy chuyển
Tiến hành cấy chuyển callus (khoảng 5 g) từ mụi trường thạch B5 sang mụi trường B5 và SH cú bổ sung chất kớch thớch sinh trưởng NAA (2,0 mg/l) và kinetin (0,2 mg/l), saccharose (20 g/l). Tiến hành cấy chuyển 4 lần (mỗi lần nuụi cấy là 35 ngày). Sau cỏc lần cấy chuyển, theo dừi hỡnh thỏi, tớnh chất
biệt húa của tế bào và xỏc định tỷ lệ tăng trưởng. Kết quả được trỡnh trong hỡnh 3.4 và hỡnh 3.5.
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});