CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5.1. Phương pháp bố trí thí nghiệm
(1) Thời kỳ cây mầm:
Hạt được gieo trong dung dịch đường sucrose theo phương pháp gây áp suất thẩm thấu của Volcova [63]. Chọn hạt giống to, khỏe, đều, có phôi sáng, không sâu mọt, không nấm mốc; khử trùng dụng cụ thí nghiệm bằng cồn 96°. Giấy lọc được sấy ở 100°C trong vòng 1 giờ, hạt được khử trùng bằng dung dịch KMnO4 1% trong vòng 5 phút. Hạt được gieo trên khay có giấy thấm, bổ sung kháng sinh nistatin 1 viên trong 1 lít dung dịch đường. Sau đó chia hạt thành 2 phần gieo trên khay có giấy thấm, mỗi khay 30 hạt:
+ Lô đối chứng (ĐC): cho hạt nảy mầm trong điều kiện tưới nước cất. + Lô thí nghiệm (TN): cho hạt nảy mầm trong điều kiện tưới dung dịch đường sucrose 0,37 M để tạo ASTT 9 atm.
Hàng ngảy bổ sung lượng nước hoặc dung dịch đường ở các lô như nhau. Tiến hành xác định các chỉ tiêu: hàm lượng proline, hàm lượng đường khử, hàm lượng ptotein tổng số, hoạt độ các enzyme amylase, lipase và catalase trong mầm đậu xanh sau 3, 5 và 7 ngày gây hạn.
(2) Thời kỳ cây con:
Thí nghiệm gây hạn nhân tạo được tiến hành theo phương pháp của Lê Trần Bình [1]. Số lượng cây/chậu là 15 cây, mỗi công thức lặp lại 3 lần.
Hạt đậu nảy mầm gieo trong chậu trồng cây chứa cát sạch. Cây được đảm bảo chế độ chăm sóc thông thường, đến ngày thứ 7 sau khi gieo, cây có 3 lá thật, gây héo lô thí nghiệm bằng cách không tưới nước và cách li với nước, lô đối chứng tưới nước bình thường. Sau 3 ngày, 5 ngày, 7 ngày gây hạn thì tiến hành thu mẫu để phân tích các chỉ tiêu hóa sinh như hàm lượng proline, hàm lượng đường khử, hàm lượng protein tổng số, hoạt độ α-amylase, hoạt độ catalase; isozyme amylase được xác định sau 2 ngày, 4 ngày, 6 ngày gây hạn; phổ điện di protein tổng số được nghiên cứu sau 2 ngày đến 6 ngày hạn.