Đánh giá đáp ứng miễn dịch trên vịt sau tiêm phòng vaccine QB7412

4. Điểm mới của đề tài

2.3.3. Đánh giá đáp ứng miễn dịch trên vịt sau tiêm phòng vaccine QB7412

- Bố trí thí nghiệm: Vịt được bố trí thử nghiệm là các thời điểm tiêm phòng khác nhau: Vịt con được lấy mẫu trước khi tiêm mũi 1 đồng thời tiêm mũi 1 lúc 14 ngày tuổi, và được lấy mẫu trước khi tiêm mũi 2, lặp lại mũi 2 lúc 28 ngày tuổi.

Số cá thể xét nghiệm mẫu là 30 cá thể . Lặp lại 3 lần lấy mẫu, 2 lần tiêm. Thời điểm lấy mẫu huyết thanh xét nghiệm vào các ngày tuổi: 14; 28 và 42; Tổng số mẫu xét nghiệm là 120 mẫu, được áp dụng theo công thức lấy mẫu đại diện và các mẫu lấy được lựa chọn ngẫy nhiên.

- Sử dụng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) để đánh giá khả năng đáp ứng miễn dịch trên vịt đối với vaccine QB7412

Bảng 2.5. Lịch tiêm phòng và lấy mẫu huyết thanh Nội dung Số lượng mẫu lấy (Trước tiêm phòng) 14 ngày Số lượng vịt (tiêm phòng lần 1) 14 ngày Số lượng mẫu lấy (Sau

tiêm phòng lần 1) 28 ngày Số lượng vịt (tiêm phòng lần 2) 28 ngày Số lượng mẫu lấy (Sau

tiêm phòng lần 2) 42

ngày

QB7412 30 30 30 30 30

Lô đối chứng 10 0 10 0 10

Ghi chú: Mẫu huyết thanh được lấy để làm xét nghiệm HI

* Nguyên liệu dùng cho phương pháp HI

- Micropipet đa kênh (8-12 kênh): 5-50l

- Micropipet đơn kênh: 50-200l, 100-1000l, đầu típ 200l, 1000l - Đĩa 96 giếng đáy hình chữ V, máng trộn chất phản ứng

- Kháng nguyên chuẩn subtype H5 4HA - Hồng cầu gà 1%

- Kháng huyết thanh chuẩn subtype H5 (dùng làm đối chứng dương tính) - PBS 0,01M; pH 7,2

* Trình tự tiến hành phản ứng

- Cho 25l PBS vào các giếng của đĩa 96 giếng

- Cho 25l huyết thanh kiểm tra vào giếng đầu tiên

- Pha loãng huyết thanh kiểm tra theo cơ số 2, bằng cách trộn đều và chuyển 25l từ giếng 1 sang giếng 2, và tuần tự đến giếng 11, hút bỏ đi 25l ở giếng 11.

- Cho 25l kháng nguyên 4 đơn vị HA vào các giếng từ 1 đến 11. Thêm 25l PBS vào giếng 12 (giếng đối chứng hồng cầu).

- Lắc nhẹ đĩa và để ở nhiệt độ phòng 30 phút.

- Cho 25l dung dịch hồng cầu 1% vào tất cả các giếng, lắc đều. - Để đĩa ở nhiệt độ phòng trong 40 phút. Sau đó đọc kết quả.

* Đọc kết quả

- Phản ứng dương tính: Hồng cầu lắng xuống đáy và chảy xuống khi nghiêng đĩa với góc 45o.

- Kết quả phản ứng được ghi vào sơ đồ đĩa phản ứng HI

Tiêu chí đánh giá của Cục Thú y: hiệu giá HI ≥ 1/16 (4 log2) được coi là hiệu giá bảo hộ của cá thể gia cầm; đàn gia cầm được bảo hộ là đàn có ≥ 70% số cá thể có hiệu giá HI ≥ 1/16 (4 log2); huyết thanh có kháng thể cao khi hiệu giá huyết thanh > 4log2, huyết thanh không có khả năng bảo hộ khi hiệu giá huyết thanh < 4log2.