3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
2.3.6.Phương pháp kháng sinh đồ
Để xác định mức độ mẫn cảm với thuốc kháng sinh của các chủng Salmonella phân lập được chúng tôi tiến hành làm kháng sinh đồ theo phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch theo (Kirbly – Bauer, 1959).
Nguyên lý của phương pháp: Các khoanh giấy đã tẩm kháng sinh đặt lên mặt thạch đã được dàn đều một lớp vi khuẩn cần kiểm tra. Kháng sinh khuếch tán trên mặt thạch tạo một gradien nồng độ, để tủ ấm 37oC/24 giờ. Đánh giá kết quả qua đường kính vô khuẩn.
Chuẩn bị:
+ Nồng độ vi khuẩn: Dùng que cấy đã vô trùng để lấy mẫu ở các ống effendorf có chứa mẫu vi khuẩn Salmonella. Sau đó tiến hành ria cấy trên môi
trường dinh dưỡng Nutrient agar và giữ ở 370 C trong vòng 12-24 h để thu sinh khối.
Hòa tan sinh khối tế bào vi khuẩn Salmonella trong ống nghiệm có chứa 5ml dung dịch canh thang sao cho mật độ tế bào vi khuẩn Salmonella đạt khoảng 106CFU/ml (bằng cách chuẩn độ), hút 200 µl (1 mẫu/2 đĩa petri) huyền dịch tế bào vi khuẩn Salmonella cấy trải trên môi trường Nutrient agar.
+ Bộ đĩa giấy các loại kháng sinh thông dụng: Streptomycin, Kanamycin, Cefoxitin, Colistin, Tetracycline, Gentamicin, Ampicillin.
Tiến hành:
+ Cấy vi khuẩn: Vortex huyền dịch vi khuẩn trong 30 giây. Lấy 0,2 ml hỗn dịch vi khuẩn láng lên đĩa thạch đã chuẩn bị từ trước, để khô đĩa thạch trong tủ ấm 10 phút trước khi đặt giấy kháng sinh.
+ Đặt khoanh giấy: các khoanh giấy kháng sinh được đặt chắc chắn và cách nhau đều xung quanh đĩa thạch và cách nhau khoảng 20 mm từ cạnh khoanh giấy này đến khoanh giấy khác và 1 khoanh giấy ở trung tâm, có thể đặt 6 khoanh giấy/đĩa.
Để đĩa thạch ở nhiệt độ phòng 30-60 phút cho kháng sinh khuếch tán đồng đều ở thạch, sau đó để úp đĩa và cho vào tủ ấm ở nhiệt độ 37oC trong 24h. Sau đó tiến hành đo đường kính vòng vô khuẩn và so sánh bảng chuẩn để tính độ nhạy cảm và kháng kháng sinh của vi khuẩn.
Bảng 2.2. Tiêu chuẩn đánh giá mức độ mẫn cảm của vi khuẩn với một số loại
kháng sinh TT Tên kháng sinh Ký hiệu Đường kính vòng vô khuẩn (mm) Kháng Trung Bình Nhạy cảm 1 Streptomycin Sm ≤11 12-20 ≥21 2 Kanamycin Kn ≤16 17-25 ≥26 3 Cefoxitin Cn ≤22 23-29 ≥30 4 Colistin Co ≤10 11-17 ≥18 5 Tetracycline Te ≤17 18-25 ≥26