P. multocida
4.16.Kết quả đánh giá khả năng gây bện hở chuột của vi khuẩn S.suis
TT Ký hiệu chủng Số chuột tiêm (con) Liều tiêm (ml) Đường tiêm Số chuột chết (con) Thời gian chết chuột (giờ) Phân lập lại vi khuẩn 1 A6 2 0,2 Dưới da 2 20 2/2
Kết quả cho thấy: chủng vi khuẩn S. suis thuộc serotype 2 có độc lực mạnh, gây chết chuột trong thời gian ngắn. Những chuột chết được mổ khám và quan sát thấy có bệnh tích tương đối giống nhau như: phủ tạng bị xung huyết, tim sưng, mềm, nhão, tích nước trong xoang bao tim, vùng xung quanh chỗ tiêm, đôi khi có hiện tượng áp xe. Khi lấy máu tim nuôi cấy thì đều phân lập được vi khuẩn S. suis thuần khiết.
Chúng tôi đã tiến hành xác định liều LD50 của vi khuẩn S. suis nghiên cứu và đã xác định được liều LD50 của S. suis serotype 2 là 4,4 x 107 CFU/0,2 ml.
4.3. NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT VACXIN ĐA GIÁ VÔ HOẠT
NHŨ DẦU PHÒNG BỆNH VIÊM PHỔI Ở LỢN DO VI KHUẨN
A. PLEUROPNEUMONIAE, P. MULTOCIDA VÀ S. SUIS GÂY RA
4.3.1. Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất vacxin đa giá vô hoạt nhũ dầu
phòng bệnh viêm phổi ở lợn do vi khuẩn A. pleuropneumoniae, P. multocida và S.
suis gây ra
4.3.1.1. Kết quả theo dõi các lô lên men sục khí
Chúng tôi đã chế tạo vacxin dạng vô hoạt có bổ trợ keo phèn và nhũ dầu theo quy trình thường quy của Bộ môn Vi trùng - Viện Thú y Quốc gia và quy trình sản xuất vacxin theo dây chuyền sản xuất công nghiệp của nhà máy vacxin GMP -
WHO theo phương pháp lên men sục khí. Các chủng vi khuẩn A. pleuropneumoniae, P. multocida và S. suis được nuôi cấy riêng từng loại vi khuẩn, mỗi loại vi khuẩn
được nuôi cấy 3 lô khác nhau bằng phương pháp lên men sục khí. Sau 8- 10 giờ lên men sục khí, lấy mẫu kiểm tra thuần khiết bằng phương pháp nhuộm Gram và ria cấy trên các loại môi trường kiểm tra, đồng thời xác định đậm độ vi khuẩn trong 1 ml canh trùng bằng phương pháp đếm số khuẩn lạc mọc trên đĩa thạch, sau đó tiến hành vô hoạt vi khuẩn bằng Formol với tỷ lệ 0,3%.
Vacxin đa giá vô hoạt có bổ trợ nhũ dầu phòng bệnh viêm phổi lợn cần đảm bảo đủ số lượng kháng nguyên có trong một liều vacxin tiêm cho lợn. Đối với mỗi một loại vi khuẩn trong bộ giống chế tạo vacxin (gồm A. pleuropneumoniae;
P. multocida và S. suis), đều được sử dụng phương pháp lên men sục khí, xác định đậm độ kháng nguyên có trong 1 ml canh trùng để làm cơ sở xác định được tỷ lệ pha trộn canh trùng mỗi loại vi khuẩn phù hợp nhất nhằm đảm bảo được số
76
lượng kháng nguyên 3 loại vi khuẩn có trong 1 liều vacxin. Kết quả các lô lên men sục khí thể hiện ở bảng 4.17
Chúng tôi đã tiến hành 3 lần nuôi cấy vi khuẩn A. pleuropneumoniae bằng phương pháp lên men sục khí, có thay đổi chế độ cung cấp khí, môi trường nuôi cấy…với 3 lần nuôi cấy khác nhau và đã cho kết quả là số lượng vi khuẩn đạt trung bình 1 x 1010 vi khuẩn/ml.