IV. CÁN B浦 J姶閏 NG D郁 N: TS T渦 NG THANH DANH
1.2.2 Bán t鰻ng h嬰p
1.2.2.1 Bán tごng hぢp Taxol tな 10 Î DAB
Rj逢挨pi"rjƒr"dƒp"v鰻ng h嬰p Taxol t瑛 10 Î DAB do Potier, Green công b嘘8亥u tiên có nk‒p"swcp"8院p"8瓜 ho衣v"8瓜pi"v逢挨pi"8嘘i c栄a b嘘n nhóm hydroxyl trong phân t穎
10 Î DAB b荏i s詠 t医n công c栄a nhóm acetyl 荏 v鵜 trí C Î 10 và chu厩i ester d-amido 荏
v鵜 trí C Î 13 qua quá trình ester hoá c栄c"t逢嬰u b壱c 1 t衣i v鵜 trí C Î 13 v噂i m瓜t beta Î
amido carboxylic acid. S詠 hi羽n di羽n c栄a chu厩i Beta Î amido 荏 v鵜 trí C Î 13 là c亥n thi院t cho ho衣t tính kháng kh嘘i u [25] khi cho beta Î lactam ph違n 泳ng v噂i alcohol v噂i s詠 có m員t c栄a m瓜v"n逢嬰pi"vƒe"pj¤p"vtqpi"8k隠u ki羽n hi羽u qu違 8吋 t衣o thành m瓜t ester Beta Î amido có th吋 s穎 d映pi"pj逢"o瓜t ch医t trung gian trong quá trình t鰻ng h嬰p taxol.
9
U挨"8欝 1.2: Pj逢挨pi"rjƒr"v鰻ng h嬰p taxol t瑛 beta Î lactam [29]
M瓜t s嘘 nhóm nghiên c泳w"8«"8逢c"tc rj逢挨pi"rjƒr"v鰻ng h嬰p có ch丑n l丑c h嬰p ch医t beta Î lactam s穎 d映ng h嬰p ch医t polyaromatic imines theo ph違n 泳ng Staudinger. Nghiên c泳u ho衣t tính c医w" vt¿e" 8«" ejq" vj医y r茨ng 1 Î N Î chrysenyl và 1 Î N Î
phenanthrenyl 3 axetoxy Î 4 Î aryl Î 2 Î azetidinones có ho衣t tính ch嘘pi"wpi"vj逢"
m衣nh. S詠 hi羽n di羽n c栄a nhóm axetoxy c栄a beta Î lactam nhóm t衣i v鵜 trí C Î 5"8«" 8逢嬰c ch泳ng minh là có ho衣t tính ch嘘pi"wpi"vj逢"e栄a h嬰p ch医v"8„"[9], [29], [30].
10 Ph違n 泳ng chuy吋p"8鰻i 10 ÎDAB 3 thành 7 Î triethylsilyl Î 10 Î DAB 4a 荏 230C v噂i s詠 có m員t c栄a tác nhân (C2H5)SiCl trong pyridine. Sau khi tinh ch院, n逢嬰ng s違n ph育o" vjw" 8逢嬰c kho違ng 84 Î 86%, còn ph違n 泳pi" 8吋 t衣o ra 7 Î O Î triethylsilyl
baccatin III 4b x違y ra 荏 8k隠u ki羽n 00C v噂i s詠 có m員t c栄a tác nhân CH3COCl trong
r{tkfkpg."n逢嬰ng s違n ph育o"vjw"8逢嬰c chi院m kho違ng 86%. H嬰p ch医t 4b có th吋 ph違n
泳ng v噂i h嬰p ch医t beta Î lactam t衣o ra h嬰p ch医v"vczqn"vtwpi"ikcp"vtqpi"8„"v衣i v鵜 trí C
Î 7 và C Î 4Ó, các nhóm hydroxyl OH 8逢嬰c b違o v羽 v噂i nhóm triethylsilyl TES và ethoxyethyl v逢挨pi"泳ng. Các nhóm th院 p {"ucw"8„"8逢嬰c thu益 rj¤p"vtqpi"8k隠u ki羽n nh姻 không làm 違pj"j逢荏pi"8院n các liên k院t ester hay các nhóm th院 taxol.
U挨"8欝 1.4: Ph違n 泳ng t鰻ng h嬰p 7 Î TES Î Baccatin III [9]
Ujkpcfc" x " Qjhwpg" 8«" vj詠c hi羽p" vj pj" e»pi" rj逢挨pi" rjƒr" dƒp" v鰻ng h嬰p m噂i taxol t瑛 d磯n xu医t 10 Î DAB 3 thông qua s詠 chuy吋n hoá ester ethyl benzoylacetate và b違o v羽 nhóm 10 Î DAB 3 khi g逸n ph亥p"8w»k"guvgt"Dgvc"Î keto vào v鵜 trí C Î 13 có m員t ch医t xúc tác qua quá trình chuy吋n hoá ester Beta Î keto và hình thành ch医t m噂i 荏 v鵜 vt "4Ó"Î OH Î 5Ó"Î NH2 và ch医t 8欝pi"rj¤p"mj»pi"8嘘i quang mà không c亥n b医t k m瓜t tr嬰 ch医t b医v"8嘘i x泳ng nào [12], [31].
11
U挨"8欝 1.5: Rj逢挨pi"rjƒr"v鰻ng h嬰p taxol c栄a Shinada và Ohfune [31]
1.2.2.2 Mじt sぐrj⇔￢pi"rjƒr"bán tごng hぢp mＴch nhánh taxol side chain
ÐTaxol side chainÑ 8逢嬰c nghiên c泳u e pi"n "o瓜t trong nh英ng e»pi"8q衣n quan tr丑ng trong quá trình t鰻ng h嬰p nên paclitaxel vì nó góp ph亥n quy院v"8鵜pj"8院n ho衣t tính sinh h丑c c栄a phân t穎 rcenkvczgn"pj逢pi"e pi"n "rj亥p"nkpj"8瓜ng, d宇 b鵜 bi院p"8鰻i nên ph違k"e„"rj逢挨pi"rjƒr"rj́"j嬰r"8吋 b違o v羽 nhóm hydroxy t衣i v鵜 trí C Î 4Ó"[32]Î
[34]. Sau khi ghép m衣ch nhánh Ðvczqn"side chainÑ vào khung baccatin, các nhóm b違o v羽 s胤 8逢嬰c lo衣i b臼 f逢噂i nh英pi"8k隠u ki羽n nh医v"8鵜pj"8吋 hình thành m瓜t phân t穎
12 Green và các c瓜ng s詠 l亥p" 8亥w" vk‒p" 8逢c" tc" rj逢挨pi" rjƒr" v鰻ng h嬰p thành công chu厩i taxol side chain b茨ng ph違n 泳pi"grqz{"jqƒ"Ujctrnguu"8吋 chuy吋n alcohol cis-
cinnamyl 16 thành nhóm alcohol epoxy 17 v噂i hi羽u su医t 61 Î 87'"vtqpi"8„"98"Î :2'"n "8欝ng phân quang h丑c [35]. D磯n ch医t trung gian này s胤 th詠c hi羽n ph違n 泳ng m荏 vòng b茨ng xúc tác azidotrimethylsilane v噂k"n逢嬰ng nh臼 ZnCl2 t衣o thành d磯n ch医t
18. Sau ph違n 泳ng kh穎 và chuy吋n hóa nhóm benzoyl, m衣ch nhánh methyl ester 4
8逢嬰c hình thành qua s詠 chuy吋n hoá gi英a O åN v噂i hi羽u su医t 23% s印n sàng cho ph違n 泳ng ghép c員p vào khung baccatin.
U挨"8欝 1.6: Quy trình t鰻ng h嬰p m衣ch nhánh taxol side chain t瑛 cis-cinnamyl [32]
Itggpg"8«"e違i ti院p"rj逢挨pi"rjƒr"epoxy hóa c栄a Sharpless trong t鰻ng h嬰p chu厩i side chain C Î 13 b茨ng ph違n 泳pi"8隠 hydro hoá methyl cinnamat trong dung d鵜ch acetone v噂i osimum teroxid, N Î methylmorpholine Î N Î Oxid (NMO), dihydroquinidin 5 Î Enqtqdgp¦qcv"*FSED+"x "qz{"jqƒ"8欝ng th運i chuy吋n thành h嬰p ch医t cis Î diol 20 8衣t hi羽u su医t kho違ng 82% và vtqpi"8„"mjq違ng 82% là 8欝ng phân quang h丑c [36], [37].
13
U挨"8欝 1.7: Quy trình t鰻ng h嬰p m衣ch nhánh t瑛 methyl cinnamat [32]
Jqnvqp"8«"8逢c"tc"rj逢挨pi"rjƒr"v鰻ng h嬰p chu厩i side chain methyl ester b逸t ngu欝n t瑛 b瓜 khung -lactam g欝m c違 g Î và Î amino axit b茨ng NaBH4 8吋 chuy吋n 23
vj pj" 8挨p" 8欝ng phân d衣ng cis 24, dùng d磯n xu医v" ejnqcegv{n" 8吋 b違o v羽 nhóm hydroxyl m噂i t衣o thành 25. M荏 vòng d磯n su医t d - lactam b茨ng TMSCl trong MeOH
8欝ng th運i b違o v羽 nhóm hydroxyl c栄a g-hydroxy d - aminoester 26 8吋 chuy吋n thành h嬰p ch医t taxol side chain methyl ester 4.
14
1.2.3 Ph違n 泳ng thu益 phân b茨ng enzyme trong bán t鰻ng h嬰p taxol 1.2.3.1 Giずi thiうu chung vｚ lipase: 1.2.3.1 Giずi thiうu chung vｚ lipase:
Lipase (tricyglycerol acyhydrolase, EC 3.1.1.3) thu瓜c h丑 serine hydrolazes,
8„pi" xck" vt”" vtqpi" swƒ" vt·pj" f鵜 hoá c栄a triacyglycerides thành di Î và monoacyglycerides, các axit béo t詠 do và glycerol. Lipase là m瓜t trong nh英ng xúc
vƒe"8逢嬰c s穎 d映ng nhi隠u nh医t và ph鰻 bi院n nh医t cho nhi隠u lo衣i ph違n 泳pi"pj逢"vjw益 rj¤p."guvgt"jqƒ."cneqjqn{ukuÈ0"x·"nó có tính ch丑n l丑c l壱p th吋 r医t cao trên nhi隠u lo衣i ch医t n隠n 8員c bi羽t là ch医t n隠p"mj»pi"vcp"vtqpi"p逢噂c nên r医v"8逢嬰c 泳ng d映ng trong t鰻ng h嬰p h英w"e挨 ch鰯ng h衣p"pj逢"8k隠u ch院 các h嬰p ch医v"8嘘i quang tinh khi院t. Các lipase tác d映ng lên các n嘘i carboxyl ester c栄a các triaciglycerol và các ch医t n隠n khác
v逢挨pi"vƒe"vtqpi"eƒe"fwpi"o»k"j英w"e挨"x噂k"n逢嬰pi"p逢噂c th医p [38]Î[40] và ho衣v"8瓜ng xúc tác di宇n ra trên b隠 m員t phân cách gi英c"rjc"p逢噂c và pha dung môi h英w"e挨"[41]. Lipase có tính 鰻p"8鵜nh cao và ho衣v"8瓜ng t嘘t trong các dung môi h英w"e挨"x "vj逢運ng không c亥n b医t k m瓜t y院u t嘘 8欝ng th運i nào cho xúc tác ph違n 泳ng. M厩i lipase có 1 giá tr鵜 pH t嘘k"逢w."u荏 h英u m瓜t nhi羽v"8瓜 t嘘k"逢w"do tr衣ng thái b隠n nhi羽t c栄a m厩i lipase khác nhau. D詠c"x q"eƒe"8k隠u ki羽n ph違n 泳ng th栄{"rj¤p"8衣v"8逢嬰e"8院n cân b茨ng và các thành ph亥n trung gian 荏 chu厩i th栄{"rj¤p"8逢嬰c tách ra nh運 s詠 k院v"vkpj."ej逢pi"e医t ho員c s逸c ký.
Lipase hi羽n di羽n trong t医t c違 các sinh v壱t t瑛 vi khu育n (ch鰯ng h衣p"pj逢"ej栄ng lo衣i Pseudomonas, Bacillus, È+."p医o"*"pj逢"ej栄ng lo衣i Candida, Penicillium."È+."ogp."
x衣 khu育n (Antinomycetes), th詠c v壱t ( t瑛 e¤{"8w"8栄, d泳c"pj逢"Veronia, Euphorbia)
8院p"8瓜ng v壱v"*pj逢"e»"n壱p t瑛 tuy院n tu液 c栄a heo PPL (Porcine pancreatic lipase)) và tên g丑i vj逢運pi"8逢嬰e"8員t theo sinh v壱v"8«"u違p"ukpj"tc"p„0"Ac"u嘘eƒe"nkrcug"vj逢挨pi"o衣i
8隠u có ngu欝n g嘘c t瑛 vi sinh v壱t [3], [38], [42]Î[45].
Nkrcug"8逢嬰c 泳ng d映ng r瓜ng rãi trong chuy吋n hoá sinh h丑c và trong t鰻ng h嬰p h英u
e挨, 8員c bi羽t lipase 8逢嬰c s穎 d映ng trong t鰻ng h嬰p h英u c挨"là s詠 phân gi違i các h厩n h嬰p racemate, nó có th吋 phân bi羽t gi英c"eƒe"pj„o"8嘘k"j·pj"*gpcvkqvqrke+"x "pj„o"8嘘i 違nh (enatiomers). Do kh違p<ng ch丑n l丑c ph違n 泳ng trên nhi隠u lo衣i dung môi h英w"e挨"mjƒe"
15 tr鵜 wpi"vj逢"jc{"p„k"eƒej"mjƒe"nkrcug"n "ej医t ho衣t hoá các y院u t嘘 phá hu益 t院 bào ung
vj逢0
1.2.3.2 Giずi thiうu lipase PCL, PFL
Theo các tác gi違 [39], [46], PCL (Lipase Amano PS) xu医t phát t瑛 vi khu育n ch栄ng Pseudomonas cepacia (còn g丑i là Burkholderia cepacia), do tên vi khu育n này
vjc{"8鰻i theo th運i gian và có nhi隠u nhà s違n xu医t nên PCL có nhi隠u tên g丑k"e pi"pj逢"
tên vi院t t逸v" mjƒe" pjcw" pj逢 là Burkholderia cepacia lipase, Altus Biologics (ChiroCLEC Î PC), Amano P, Amano P Î 30, Amano PS, Amano LPL Î 80, Amano LPL Î 200S. T医t c違 các tên cho cùng m瓜v"nkrcug"8„"8隠w"8逢嬰c phân l壱p t瑛 vi khu育n ATCC 21808. PCL là enzyme hình c亥u có kh嘘k"n逢嬰ng phân t穎 là 30 Î 35kDa, chu厩i polypeptide c医u t衣o t瑛 320 amino axit. PCL có d衣ng b瓜t màu tr逸ng, có mùi nh姻, tan m瓜t ph亥p"vtqpi"p逢噂c, ho衣v"8瓜ng t嘘t nh医t 荏 pH t瑛 7 Î 8.
PFL (lipase Amano AK) xu医t phát t瑛 vi khu育n ch栄ng Pseudomonas fluorescens
x "e pi"e„"pjk隠u tên g丑k"e pi"pj逢"v‒p"xk院t t逸v"mjƒe"pjcw"pj逢"Cocpq"*nkrcug"CM+."
Amano (lipase YS). PFL có d衣ng b瓜t màu nâu, có mùi nh姻, tan m瓜t ph亥n trong
p逢噂c, ho衣v"8瓜ng t嘘t nh医t 荏 pH t瑛 7 Î 8. PCL, PFL xúc tác cho ph違n 泳ng thu益 phân triglicerid v噂i s嘘 C" 8.
1.2.3.3 CＸw"vt¿e"x "e￢"ejｘ phＶn とng cてa lipase: C医u trúc lipase:
Theo các nghiên c泳w"ejq"8院n nay có kho違ng 34"nkrcug"8逢嬰c gi違i thích có 8員c
8k吋m c医u trúc chung [46], [47]. Trung tâm ho衣v"8瓜ng trong t医t c違 các lipase 8隠u hình thành t瑛 dc" czkv" cokp" 8„" n " Ugtkpg" *" Ugt+." Ccurctvcvg" *Cur+" jq員c Glutamate (Glu) và Histidine (His) g丑i là b瓜 ba xúc tác. C医u trúc ba chi隠u c栄a t医t c違 các lipase theo m瓜t motif ph鰻 bi院n là chu厩i n院p g医p khúc g/ Î hydrolase g欝m m瓜t b違ng (sheet) d làm trung tâm t衣o b荏i các d違i s嬰i (strand) dv逢挨pi"v詠 nhau d違i s嬰i d th泳 hai s逸p x院r"pi逢嬰c chi隠u so v噂i các d違i s嬰i còn l衣i. Các chu厩i xo逸n c n茨m xen k飲 các d違i s嬰i d t瑛d3 8院n d8 và n茨m 荏 hai bên c栄a b違ng d; b違ng d xo逸n v隠 bên trái sao cho
16 b隠 m員t c栄a b違ng t衣o thành n穎a hình tr映 và góc t衣o b荏i d違i s嬰k"8亥u tiên và d違i cu嘘i cùng kho違ng 900.
Hình 1.7: Mô hình g医p khúc ba chi隠u v噂i b瓜 ba xúc tác Ser Î Asp Î His [27]
E挨"ej院 ph違n 泳pi"nkrcug<"E挨"ej院 bi Î bi ping Î pong:
ay
Hình 1.8: E挨"ej院 bi Î bi ping Î pong
Vtqpi"e挨"ej院 này, ph違n 泳ng phát xu医t t瑛 trái sang ph違k"8逢嬰c th吋 hi羽n b茨pi"o k"
tên n茨m ngang . Ch医t n隠p"8亥u tiên S1 ph違n 泳ng v噂k"Gp¦{og"8吋 t衣o thành ph泳c h嬰p
8亥u tiên ES1 và phóng thích ra s違n ph育m P1 ( m瓜t m違nh c栄a ch医t n隠n S1 dcp"8亥u).
Gp¦{og"dcp"8亥u bi院p"8鰻i thành ph泳c h嬰p th泳 hai F* có mang ph亥n còn l衣i c栄a S1 ti院p t映c ph違n 泳ng v噂i ch医t n隠n S2 8吋 t衣o thành ph泳c h嬰p th泳 ba FS2 và phóng thích s違n ph育m P2 8欝ng th運i tr違 l衣k"gp¦{og"dcp"8亥u E. Emzymg"vjgq"e挨"ej院 này t欝n t衣i trong hai tr衣pi"vjƒk"8„"n "vt衣pi"vjƒk"dcp"8亥u E và tr衣ng thái bi院p"8鰻i v隠 m員t hoá h丑c E* g丑i là tr衣ng thái trung gian ph違n 泳pi0"Vtqpi"e挨"ej院 này, ch医t n隠n S1 n嘘i k院t làm
vjc{"8鰻i enzyme 荏 tr衣pi"vjƒk"dcp"8亥u E thành E* b茨ng cách giao m瓜t nhóm ch泳c FS2 E S1 ES1 P1 F* S2 P2 E
17 vào trung tâm ho衣v"8瓜pi"*cevkxg"ukvg+"x "ucw"8„"8逢嬰c phóng thích P1. Sau khi ch医t n隠p"8亥u tiên P1 8逢嬰c phóng thích, m瓜t ch医t n隠n S2 m噂i có th吋 k院t n嘘i l衣i ph違n 泳ng v噂i E* và tái t衣o tr衣pi"vjƒk"dcp"8亥w"GÈ [48]Î[50].
E挨"ej院 ch栄 y院u c栄c"z¿e"vƒe"nkrcug"n "vjgq"e挨"ej院 bi Î bi ping Î pong [48]Î[53]. Nó là m瓜t ph違n 泳pi"jck"d逢噂c. Hai ch医t n隠p"8逢嬰c chuy吋n thành hai s違n ph育m (bi Î
bi) và s違n ph育o"8亥u tiên phóng thích kh臼i trung tâm ho衣v"8瓜pi"vt逢噂c khi ch医t n隠n th泳 hai vào (ping Î pong). A亥u tiên, trung tâm ho衣v"8瓜ng serine c栄a lipase có nhi羽m v映pj逢"o瓜t tác nhân nucleophin, 8逢嬰c acyl hóa v噂i nhóm cacboxyl c栄a ch医t n隠n 1 (ch医t cho acyl) t衣o thành m瓜t trung tâm t泳 di羽n ES* và các alcol R'OH (ho員c p逢噂c n院u R)?"J+"8逢嬰e"rj„pi"vj ej"8吋 cung c医p cho các enzyme acyl (ES). Ch医t cho acyl có th吋 là ester carboxylic, acid carboxylic, anhydric, beta Î lactam ho員c
ncevqpÈ0Th泳 hai, ph泳c h嬰r"gp¦{og"ce{n"*GU+"8逢嬰e"8隠 acyl hoá (deacylation) b荏i tác nhân nucleophin pj逢""pj„o"j{ftqz{n"e栄a ch医t n隠n 2 ( có th吋n "p逢噂c ho員c alcol) t衣o ra m瓜t trung gian t泳 di羽n th泳 hai (EP*), phân h栄y tái t衣o tr衣ng thái enzyme ban
8亥u (E) và các s違n ph育o"ce{n"*R+0"Pj逢"x壱y, hai khu ph泳c h嬰p trung gian (ES * và
GR",+"vjco"ikc"x q"e挨"ej院 ph違n 泳ng. Ester trong ph違n 泳ng th栄{"rj¤p"8„pi"xck"vt”" pj逢"ej医t n隠n 1 trong s詠 hình thành c栄a các enzyme acyl. Vì v壱y, vi羽c hình thành và phóng thích c栄a trung gian t泳 di羽p"8亥u tiên (ES *) quy院v"8鵜nh k院t qu違 x "8瓜 ch丑n l丑c c栄a xúc tác lipase th栄y phân. Tuy nhiên, 荏 8瓜 phân gi違k"8瓜ng c栄c"t逢嬰u, s詠 hình thành và phóng thích c栄a trung tâm t泳 di羽n th泳 hai (EP *) là quan tr丑ng b荏k"x·"t逢嬰u
18
Hình 1.9: E挨"ej院 xúc tác c栄c"nkrcug0"Z¿e"vƒe"Czkv"1"dc¦挨"vj»pi"swc"e挨"ej院 Bi Î bi Ping
ÎRqpi"vtqpi"8„"G"n "gp¦{og."GU","x "GR","n "eƒe"rj泳c ch医t enzyme Î ch医t n隠n và
enzyme Î s違n ph育m. [49]
19
1.2.3.4 Phân giＶk"8じng hがc vずi PCL, PFL
Theo các tác gi違 [39], [47], [54], [55], PCL, PFL có th吋 dùng làm xúc tác cho nhi隠u ch医v"pj逢"cneqn."cekf."cokp."guvgtÈTrong ph違n 泳ng phân gi違i alcohol nh鵜 c医p ho員c ester, Kazlauskas 8«"d詠 8qƒp"8欝pi"rj¤p"8嘘i quang s胤 cho ph違n 泳ng phân gi違i
pjcpj"n "8欝ng phân có nhóm th院e„"m ej"vj逢噂c l噂n L có s嘘 C œ 3 và có nhóm th院 có
m ej"vj逢噂c trung bình M có C œ 2; mjk"vjc{"8鰻i nhóm th院 L và M thì ch医t n隠n s胤
không phù h嬰p v噂i trung tâm ho衣v"8瓜ng c栄a lipase làm cho ph違n 泳ng x違y ra s胤 ch壱m
j挨p0"
Trong s詠 ch丑n l丑e"8欝ng rj¤p"8嘘i quang ph違n 泳ng thu益 phân hay ester hoá thì
8欝ng phân R cho ph違n 泳pi"pjcpj"j挨p"8欝ng phân S. Kazlaukas cho r茨ng s詠 ch丑n l丑c
8嘘i phân c栄a lipase ph亥n l噂n ph映 thu瓜c vào c医u trúc c栄a ch医t n隠n, h亥u h院t các lipase
8隠w"8逢嬰e"逢w"vk‒p"ejq"ej医t 8欝ng phân có c医u hình R mang nhóm th院 nh臼 và l噂n t衣i tâm b医v"8嘘i x泳ng. S詠 ch丑n l丑e"p {"e pi"v<pi"mjk"e„"u詠 khác bi羽t v隠m ej"vj逢噂c c栄a hai nhóm th院 ngày càng l噂p."m ej"vj逢噂c c栄a nhóm th院 nh臼 s胤 làm gi違m kh違 p<pi"
ph違n 泳ng c栄a ch医t n隠n v噂i lipase, n院w"p„"x逢嬰t quá carbon thì ch医t n隠n s胤 ph違n 泳ng ch壱m ho員c không ph違n 泳pi0" Ak隠w" p {" 8«" 8逢嬰c ki吋m nghi羽m trên 130 ester c栄a alcohol nh鵜 c医p 8嘘i v噂i các lo衣i lipase pj逢 PCL, CRLÈ d詠c"vt‒p"m ej"vj逢噂c c栄a các nhóm th院 t衣i tâm b医v"8嘘i x泳ng x "8逢嬰c g丑i là Ðquy t逸c th詠c nghi羽m KazlaukasÑ. Quy t逸c th詠c nghi羽o"p {"f́pi"8吋 d詠8qƒp"8嘘k"rj¤p"逢w"vk‒p"ejq"cneqjqn"x "guvgt"e栄a
czkv"ectdqe{nke"pj逢pi"8瓜 tin c壱y trong d詠 8qƒp"8嘘i phân cho ester s胤 th医r"j挨p"uq"
20
Hình 1.11: A嘘i phân R c栄c"guvgt"8逢嬰e"逢w"vk‒p"ejq"rj違n 泳ng thu益 phân và transester v噂i xúc tác lipse (nhóm th院 L>M)
1.2.3.5 Mじt sぐ phＶn とng tごng hぢp mＴch nhánh có sぬ dつng enzyme lipase
Jqkpi"n "pi逢運k"8亥w"vk‒p"8«"rjƒe"vj違o quy trình t鰻ng h嬰p chu厩i side chain C Î 13 d詠a trên tuy院p"8逢運ng enzyme x "8逢嬰c Chen và c瓜ng s詠 8«"v鰻ng h嬰p th詠c t院 chu厩i side chain C Î 13 b茨ng ph違n 泳ng enzyme hoá chiral trans Î phenylglycidic esters s穎
d映ng vi khu育n Mucor michei (Amano, MAP Î 10) (U挨"8欝 1.9) [[56] qua m瓜t chu厩i các ph違n 泳ng chuy吋n v鵜 c医u hình c栄a (2R, 3S) Î epoxide (-)Î27 v噂i diethylamine hydrobromide và diethylaluminium clorua t衣o thành (2R, 3R) bromide Î hydroxy
29. Ph違n 泳ng benzoyl hoá, 8隠 hydro hoá và thu益 phân b茨ng K2CO3 trong methanol
vjw" 8逢嬰c chu厩i ÐVczqn"side chainÑ 8衣t hi羽u su医t 80% t瑛 (-) -27. M員v" mjƒe" t逢嬰u
azido (+) -33 t衣o ra t瑛 (+) - 28 b茨ng ph違n 泳ng m荏 vòng epoxide qua quá trình chuy吋p"8鰻k"dgp¦q{n"n o"8違q"pi逢嬰c c医u hình 荏 v鵜 trí C Î 4Ó."vjw益 phân v噂i HCl thu
21
U挨"8欝 1.9: Quy trình t鰻ng h嬰p chu厩i side chain t瑛 trans Î phenylglycidic esters [56]
Sih và c瓜ng s詠8«"e»pi"d嘘 m瓜v"rj逢挨pi"rjƒr"mjƒe"8吋 t鰻ng h嬰p chu厩i side chain b茨ng d磯n xu医t 3 Îhydroxy Î 4 Î phenyl Î "Încevco"e„"8瓜 tinh khi院t quang h丑c qua quá trình th栄y phân ch丑n l丑c và chuy吋n hoá c栄a h厩n h嬰p raxemic beta Î lactam gi英a
guvgt" x " t逢嬰u v噂i s詠 hi羽n di羽n c栄c" p逢噂c và/ ho員e" t逢嬰u h英w" e挨" x噂i m瓜v" n逢嬰ng enzyme ho員c vi sinh v壱t có kh違p<pi"z¿e"vƒe"ejq"swƒ"vt·pj"vj栄y phân ch丑n l丑c [42]. M瓜t h厩n h嬰p beta Î lactam trong dung môi h英w"e挨"8逢嬰c k院t h嬰p v噂k"8欝ng ch医v"8吋
t衣o thành m瓜t h厩n h嬰p ph違n 泳pi." vtqpi" 8„" e„" mjq違ng 1 gam Beta Î lactam v噂i kho違ng t瑛7"on"8院p"322"on"8欝ng ch医v."8k隠u ch雨nh và duy trì pH 荏 kho違ng t瑛9"8院n 8 v噂i b瓜 dung d鵜ej"8羽m phosphate. Dung môi cho pha h英w"e挨"có th吋 b医t k dung môi h英w"e挨"p q"e„"kh違 p<pi tr瓜n l磯n trong p逢噂c ch鰯ng h衣p"pj逢"vqnwgp."dgp¦gp."jgzcp."
cyclohexane, xylene, dichloromethane, etherÈ."rjc"p逢噂c có th吋 n "p逢噂c c医t, dung d鵜ej"8羽o"8員c bi羽t là dung d鵜ej"8羽m photphate v噂i t雨 l羽 th吋 tích dung môi hai pha t嘘t nh医t là kho違pi"32"8院n 90 ph亥p"vt<o"vjgq"vj吋 tích pha h英w"e挨"x "mjq違pi";2"8院n 10 ph亥p"vt<o"vjgq"vj吋 tích c栄c"rjc"p逢噂c. L詠a ch丑n th運i gian ph違n 泳ng d詠c"vt‒p"8欝ng ch医t, nhi羽v"8瓜 và n欝pi"8瓜 enzyme. Nhi羽t 8瓜 làm vi羽c t瑛 kho違ng 4°C Î 60°C, t嘘k"逢w"
nh医t là kho違ng 300C Î 50°C [3], [43], [44]; th運i gian ph違n 泳ng thích h嬰p có th吋
khác nhau tùy thu瓜e"x q"n逢嬰ng enzyme s穎 d映ng và m泳e"8瓜 ho衣v"8瓜ng c栄a nó, ch鰯ng