IV. CÁN B浦 J姶閏 NG D郁 N: TS T渦 NG THANH DANH
4.3.2 S違n ph育m t衣o thành beta Î lactam 1B:( )Î cisÎ 1Î (p Î methoxylphenyl)Î
K院t qu違:
Tごng hぢp: Ti院n hành theo Thí nghiうm 1 m映c 3.3 vjw"8逢嬰c 2,82g 49B tinh th吋 tr逸ng ánh kim, 8衣t hi羽u su医t 46,77 %, ti院n hành theo Thí nghiうm 2 m映c 3.3 vjw" 8逢嬰c
2,88g 49D tinh th吋 tr逸ng ánh kim."8衣t hi羽u su医t 47,29 %
Tính chＸt: tinh th吋 hình kim màu tr逸ng tan trong ethylacetat, aceton, methanol, ít tan trong n-hexan.
Nhiうv"8じ nóng chＶy: t49B = 133 Î 1360C; t49D = 132 Î 1370C;
Phご IR (KBr), max cm-1: 1710 (-C= O), 3270 (-OH) (Hình 4.5)
Hình 4.5: Ph鰻 IR c栄a h嬰p ch医t Beta Î lactam 1B 49B, D 0.00E+00 1.00E+01 2.00E+01 3.00E+01 4.00E+01 5.00E+01 6.00E+01 7.00E+01 4.00E+02 8.00E+02 1.20E+03 1.60E+03 2.00E+03 2.40E+03 2.80E+03 3.20E+03 3.60E+03 4.00E+03
54
Kiあm tra sＶn phｂm bｊng TLC, HPLC: Rf = 0, 38 (h羽 C) (Hình 4.6 Î 4.8), (PL Î
11, PL Î 12)
Phご khぐi MS *"GUK"+"e„"o k"kqp"rj¤p"v穎 v噂i m/z: 269,11. MNa+ d詠 ki院n: 292,11.
Vj逢"xk羽n máy cho bi院t công th泳c phân t穎 là: C16H15NO3 (PL - 13)
Phご1H NMR (DMSO, 500MHz):f ppm: 3,652 (s, 3H, OCH3 ); 5,135 Î 5,159 (q, J = 5 Î 7Hz, 1H, CH Î OH); 5,270 Î 5,281(d, J= 5Hz, 1H, CH Î Ph); 6,070 (d, J =
7Hz, 1H, OH); 6,865 ( d, J= 9MHz, 2H, H Î Aromatic); 7,184 Î 7,362 (M, J = 4,5
Î 5Hz, 7H, H Î Aromatic) (PL Î 14)
K院t lu壱n: Ph鰻 IR, ph鰻 kh嘘i MS, ph鰻1H NMR phù h嬰p v噂i c医u trúc c栄a (-) Î cisÎ 1
Î (p Î methoxylphenyl)Î 3 Î hydroxy Î 4 Î phenylazetidin Î 2 Î one.
Góc quay c詠c riêng: (c 0,5, CHCl3)
(c 0,5, CHCl3)
A鵜nh danh c医u hình trên 49B, 49D: góc quay c詠c c栄a h厩n h嬰p ester sau khi tách b茨ng s逸c ký c瓜v"8q"8逢嬰c trên tri隠n quang k院 là Î 11,840 và Î 13,980. So sánh v噂i giá tr鵜 chu育n c栄a 49B *p<pi"uw医t tri隠n quang c栄a (+)48 là +70 và (-)48 là - 70) [42]. D医u c栄a h厩n h嬰p trùng v噂i d医u c栄c"8嘘i phân (-+"jc{"8嘘i phân này chi院o"逢w"vj院 trong h厩n h嬰p sau ph違n 泳pi0"Pj逢"x壱{."8嘘i phân (-+"8«"8逢嬰e"逢w"8«k"ejq"rj違n 泳ng th栄y phân v噂i xúc tác Amano AK và PS t衣o s違n ph育m alcol.
CTPT: C16H15NO3
55
Bàn lu壱n:
Theo các tài li羽u nghiên c泳u [12], [42], [66] và theo th詠c nghi羽m, các lipase bi院p"8鰻i thích h嬰p nh医t cho quá trình th栄y phân và bi院p"8鰻i là lipase Amano PS và
Cocpq"CM."8逢嬰e"8ƒpj"ikƒ"ecq"x隠 s詠 ch丑n l丑e"8嘘i phân và t嘘e"8瓜 ph違n 泳ng xúc tác h嬰p lý cho ch医t n隠p"mj»pi"vcp"vtqpi"p逢噂e"x q"vtqpi"fwpi"o»k"p逢噂c, b鰻 sung m瓜t
8欝pi"fwpi"o»k"x q"8吋 c違i thi羽n t嘘e"8瓜 ph違n 泳ng. Ph違n 泳ng thu益 phân x違y ra trên b隠
m員t phân cách gi英c" rjc" p逢噂c và dung môi h英w" e挨." f́pi" fwpi" o»k" cegvtqpkvtkn"
CH3EP"8吋 hoà tan h嬰p ch医t beta Î lactam (±) 48 vì beta Î lactam (±) 48 không tan
vtqpi"p逢噂c trong khi enzyme l衣k"vcp"vtqpi"p逢噂c. Có th吋 thay dung môi CH3CN b茨ng
cegvqp."vqnwgp000pj逢pi"j嬰p ch医t beta Î lactam (±) 48 tan kém trong toluen nên t衣o b隠 m員v"rj¤p"eƒej"mfio"j挨p"n o"ejq"swƒ"vt·pj"vjw益 phân ch壱o"j挨p."vj運i gian ph違n
泳pi"n¤w"j挨p0
Có th吋 s穎 d映ng dung d鵜ch 8羽m pH = 7 c栄a Merk (1), dung d鵜ch 8羽m c栄a Hanna (2) ho員c dung d鵜ej"8羽m phosphate (3) t詠 pha thay cho dung m»k"p逢噂c thì th医y r茨ng quá trình thu益 phân c栄a (1) nhanh h挨n, thu益 phân c栄a (3) có ch壱m h挨n nh逢ng không
8ƒpi k吋."8逢嬰e"zgo"pj逢"n "v逢挨pi"8逢挨pi0"Eƒe"v k"nk羽u nghiên c泳u cho th医{"e pi"u穎
dung d鵜ej"8羽o"rjqurjcvg"x·"o»k"vt逢運pi"8羽m phosphate 鰻p"8鵜pj"j挨p."d隠p"j挨p0"Ti院n hành thu益 phân v噂i 2 lo衣k"gp¦{og"Cocpq"CM"x "Cocpq"RU"vtqpi"8k隠u ki羽n: c嘘 8鵜nh t益 l羽 th吋 tích dung d鵜ej"8羽m pH = 7, dung môi CH3EP."épi"n逢嬰ng (g) m磯u beta Î lactam (±) 48 pj逢"pjcw, vjc{"8鰻i n逢嬰ng enzyme theo t益 l羽pj逢"ucw<
V噂i enzyme Amano AK:
/ Thu益 phân theo t益 l羽 beta Î lactam (±) 48 : enzyme Amano AK = 2: 0,5. Sau
6h, ki吋m tra ph違n 泳ng b茨pi"VNE."ej逢c"e„"f医u hi羽u ph違n 泳ng. Sau 48h, ph違n 泳ng m噂i b逸v"8亥u thu益rj¤p"pj逢pi"rj違n 泳ng x違y ra r医t ch壱m, theo dõi qua TLC.
56
Hình 4.6: TLC ph違n 泳ng theo t益 l羽 2:0,5 v噂i enzyme Amano AK
/ V<pi"v益 l羽 enzyme AK lên theo t益 l羽 4<38院n 2:2, th医y r茨ng ph違n 泳ng x違y ra
pjcpj"j挨p0
Hình 4.7: TLC ph違n 泳ng thu益 phân theo t益 lê 2:1 và 2:2 v噂i enzyme Amano AK
V噂i enzyme Amano PS:
/ Thu益 phân beta Î lactam v噂i enzyme PS theo t益 l羽 4<2.70"Ucw"8j."8«"vj医y có d医u hi羽u ph違n 泳ng x違y ra.
57
Hình 4.8: TLC ph違n 泳ng thu益 phân theo t益 l羽 2:0,5 v噂i enzyme Amano PS
A吋 so sánh kh違 p<pi"e栄a 2 lo衣i enzyme, cho ph違n 泳ng cùng t益 l羽 1:1, cùng
n逢嬰ng dung môi CH3EP."n逢嬰ng dung d鵜ej"8羽m, th運i gian ph違n 泳ng ... ki吋m tra kh違 p<pi"vjw益 phân tách s違n ph育m qua HPLC (PL Î 22, PL Î 23), nh壱n th医y r茨ng:
Th運i gian ph違n 泳ng thu益 phân c栄a lipase Amano AK khá ch壱m, kho違ng sau 30h m噂i có d医u hi羽u ph違n 泳ng, t嘘p"n逢嬰ng enzyme khá nhi隠u, ttqpi"mjk"8„"vj運i gian ph違n 泳ng thu益 phân c栄a lipase Amano PS khá nhanh, kho違pi"ucw"8j"8«"e„"f医u hi羽u ph違n 泳ng."n逢嬰pi"gp¦{og"f́pi" v"j挨p.
Sau kho違ng th運i gian 10 ngày, quan sát b茨ng TLC, s詠 xu医t hi羽n c栄a các m磯u h厩n h嬰p sau ph違n 泳ng trên TLC h亥w"pj逢"mj»pi"vjc{"8鰻k0"Ak隠u này ch泳ng t臼3"8欝ng phân beta Î lactam ph違n 泳ng t嘘t v噂i enzyme lipase, còn m瓜v"8欝ng phân kia thì ph違n
泳ng ch壱o"j挨p"*"jk羽u su医t beta Î lactam còn l衣k"vjw"8逢嬰c sau ph違n 泳ng là kho違ng
72'+0"Vw{"pjk‒p."fq"mj»pi"e„"8k隠u ki羽p"rj¤p"v ej"8瓜 tinh khi院t quang h丑c ee c栄a s違n ph育m b茨ng HPLC chiral nên tôi th穎f́pi"rj逢挨pi"rjƒr"ejw{吋n d鵜ch 1H Î NMR b茨ng cách dùng ch医t d鵜ch chuy吋n hóa h丑c Eu (hfc)3 khi ti院p"j pj"8q"3J"Î NMR.
Pj逢pi"m院t qu違 các m磯w"8q"8隠u cho th医y không có s詠 d鵜ch chuy吋n c栄a các proton trong h嬰p ch医v"p‒p"e pi"mj»pi"zƒe"8鵜pj"8逢嬰c ee.
Các phân t穎 ejktcn" vj逢運pi" 8逢嬰c g逸n nhãn theo d医u hi羽u quay c映 th吋 c栄a chúng."pj逢"vtqpi"*-+- 49A và - (-)-49A ho員c (±)-49A cho h厩n h嬰p racemic. Tuy
40h 6h
58 nhiên, không có m嘘i quan h羽 nào 8鵜nh danh gi英a R / S c栄a m瓜t phân t穎 và các d医u hi羽u c栄a s詠 quay c映 th吋 c栄a chúng mà không th詠c hi羽n m瓜t thí nghi羽m phân c詠c k院
nào ho員c tìm trong các tài li羽w."ej¿pi"v»k"mj»pi"e„"#"v逢荏pi"8„"*-)-49A có c医u hình
S và (+)-49A có c医u hình R.