- T Bunyapaiboonsri et al 2009, Một Hêmiacêtan mới có vòng kép và đơn, isariotin sE (1) và F (2), cùng với TK57164A (3) đã được phân lập từ nấm ký sinh côn trùng Isaria tenuipes BCC
2.4.3.Phương pháp xác định số lượng bào tử
Nồng độ bào tử nấm được xác định bằng buồng đếm hồng cầu.
* Cấu tạo buồng đếm
Đó là 1 lam kính dày (kích thước 7 cm x 3 cm x 0,5 cm), có 4 rãnh ngang và 1 rãnh dọc, có 225 ô vuông lớn. Trong đó có 25 ô lớn chính giữa được chia thành các ô vuông nhỏ (1 ô lớn có 16 ô nhỏ).
Kích thước của mỗi ô nhỏ như sau: mỗi cạnh bằng 1/20 mm và sâu 1/10 mm. Như vậy thể tích của 1 ô vuông nhỏ là: 1/20 x 1/20 x 1/10 = 1/4000 (mm3).
* Phương pháp đếm
- Cách pha dịch nấm để đếm
+ Đối với môi trường PDA: lấy phần khuẩn lạc của nấm cho vào 1 cốc đong nhỏ cùng với 10 ml nước cất 2 lần. Dùng đũa thủy tinh khuấy đều cho các bào tử hòa tan vào trong nước.
+ Đối với môi trường lên men rắn: Lấy 1 gam hỗn hợp cả cơ chất môi trường và nấm, cho vào cốc đong nhỏ với 10 ml nước cất 2 lần. Dùng đũa thủy tinh đánh đều.
Sau đó, dùng lưới lọc (tấm lưới lọc của Nhật Bản) lọc hỗn hợp dung dịch vừa pha chế để đảm bảo chỉ có bào tử được lọt qua.
Nhỏ vào dịch lọc 1 - 2 giọt hỗn hợp gồm Tween 80 và cồn 960 với tỷ lệ 1 : 1, khuấy đều. Hỗn hợp này có tác dụng giúp ổn định các bào tử trong dịch lọc để dễ dàng hơn cho việc đếm.
+ Nhỏ 1 giọt bào tử đã pha loãng lên buồng đếm, đậy lamen lên dùng giấy thấm, thấm những dịch thừa xung quanh.
+ Đặt buồng đếm lên kính hiển vi điều chỉnh kính hiển vi ở vật kính 10 x 40. Dưới kính hiển vi sẽ thấy được đường kẻ ô vuông. Độ rộng một ô vuông gồm 16 ô vuông nhỏ và bao quanh là 3 đường kẻ. Có 25 ô vuông trên một bảng kẻ của buồng đếm.
+ Đếm số lượng bào tử trong 5 ô lớn, mỗi ô lớn có 16 ô nhỏ. + Chọn 4 ô, ở 4 góc và một ô chính giữa buồng đếm.
+ Đếm 3 lần lấy giá trị trung bình.
* Công thức tính bào tử
- Cách tính bào tử trung bình
X = (a + b + c)/ 3
Trong đó: a, b, c là tổng số bào tử đếm được ở 3 lần. X là giá trị trung bình của 5 ô vuông.
- Sử dụng 1 µl chất lỏng bào tử cho vào 25 ô vuông, số bào tử tập trung trong 1 ml sẽ là: c = X x 5 x 104
- Cho n là số lần pha loãng và C là số bào tử tập trung trong nguồn gốc dung dịch: C = c x n.