III. NỘI DUN GỜ NGUYÊN LIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.1. Phương pháp lấy mẫu và bảo quản
- Phạm vi lấy mẫu:
Trong chương trình giám sát thì ựối tượng lấy mẫu là trâu, bò tại các ựịa phương (vùng khống chế và vùng ựệm) bắt buộc phải tiêm phòng. Trâu, bò ở các tỉnh ựược tiêm phòng vacxin LMLM ựợt I trong tháng 3 và tháng 4 năm 2010, ựợt II vào tháng 9 và tháng 10. Tiêm mũi vacxin ựầu tiên của năm 2010 cách mũi thứ hai (hoặc mũi tiêm cuối cùng) của năm 2009 là 5 Ờ 6 tháng; mũi thứ hai năm 2010 cách mũi thứ nhất năm 2010 là 6 tháng. Riêng ựối với gia súc mới tiêm phòng lần ựầu bắt buộc tiêm phòng 2 mũi, mũi thứ 2 cách mũi thứ nhất 28 ngày. đối với bê, nghé tiêm phòng lần ựầu từ 4 tuần tuổi trở lên.
Mẫu ựược lấy từ 3 Ờ 5 thôn/xã hoặc phường, thị trấn. Số lượng trâu, bò cần lấy trong mỗi xã, phường, thị trấn là 45con. Thôn, ấp lấy mẫu ựược chọn
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 31
ngẫu nhiên. đây là phương pháp chọn mẫu ngẫu nhiên dựa trên nguyên tắc xác suất thông kê có ựộ tin cậy cao (95%CI ). Mẫu lấy tập trung trong một giai ựoạn ngắn, dung lượng mẫu ựủ lớn và có tắnh ựại diện cho quần thể nghiên cứu. đánh số thứ tự số 1, 2, 3Ầtất cả số lượng trâu, bò trong 3 Ờ 5 thôn, ấp ựã ựược chọn trên sau ựó dùng phần mềm Ecel chọn ngẫu nhiên 45 con trâu, bò ựể lấy mẫu. Mẫu ựược lấy sau ắt nhất 01 tháng kể từ khi trâu, bò ựược tiêm phòng theo quy ựịnh.
Cố ựịnh gia súc trong gióng giá, cắt lông, sát trùng vùng tĩnh mạch cổ (tại vị trắ lấy máu). Có thể lấy máu theo cách sau:
- Lấy bằng bơm tiêm: đưa mũi kim vào tĩnh mạch cổ, hút 3-5ml máu, cho vào ống nghiệm 10ml vô trùng ựã chuẩn bị sẵn.
- Lấy bằng kim hai ựầu và ống chân không: Vặn chặt kim hai ựầu vào giá ựỡ kim, ựưa ống chân không vào trong giá ựỡ kim và ấn cho kim xuyên vào nắp cao su của ống. Lưu ý chỉ ựâm kim vào tới ơ nắp cao su ựể không làm mất chân không trong ống. đưa mũi kim vào tĩnh mạch cổ, ựồng thời ấn mạnh ống chân không cho kim xuyên vào bên trong ống. điều chỉnh phần mũi kim ựi vào trong lòng tĩnh mạch cổ, áp suất do chân không trong ống sẽ tự hút máu vào ống.
đặt ống máu nghiêng một góc 450 ở nhiệt ựộ phòng khoảng 2 giờ ựển cố ựịnh cho máu ựông. Bảo quản ống máu ở nhiệt ựộ mát (40C) và chuyển ựến phòng thắ nghiệm.
- Cách chắt huyết thanh: Ly tâm các ống máu ở tốc ựộ 1500 vòng/phút trong 10 phút, sau ựó chắt huyết thanh cho vào ống nhựa eppendorf 2ml, có nắp, vô trùng ựã chuẩn bị sẵn.
- Bảo quản mẫu huyết thanh ở ngăn mát tủ lạnh. Theo quy ựịnh, mẫu máu gia súc ựược bảo quản lạnh (40C). Trong trường hợp lấy mẫu nhưng
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 32
không có ựiều kiện gửi ngay ựến Trung tâm chẩn ựoán Thú y trung ương thì mẫu ựược bảo quản ở ngăn ựá tủ lạnh hoặc tủ âm.
Trong trường hợp ựể lâu, bảo quản huyết thanh ở -200C và tránh lấy huyết thanh ra khỏi tủ lạnh nhiều lần do hiện tượng ựông tan sẽ làm giảm hiệu giá kháng thể.