5.1 Kết luận
1. Xác ựịnh ựược các thông số cần thiết cho quá trình chuyển gen vào cây hoa
ựồng tiền:
- Callus là nguồn mẫu thắch hợp nhất
- Thời gian ựồng nuôi cấy 2 ngày là thắch hợp nhất - Thời gian tiền nuôi cấy 5 ngày là thắch hợp nhất
- Ngâm mẫu trong dung dịch vi khuẩn là phương pháp lây nhiễm thắch hợp nhất
- Lắc mẫu trong dung dịch MS có bổ sung 500 ml/l cefotaxime với thời gian 5-10 giây là kỹ thuật rửa khuẩn thắch hợp nhất.
2. Xác ựịnh ựược sự hiện diện của các gen cần chuyển vào
- Sau 2 tháng chọn lọc thu ựược 12 mẫu sống trên trên môi trường chọn lọc có bổ sung thuốc trừ cỏ PPT 2,5 ml/l. Bước ựầu khẳng ựịnh chúng mang gen bar kháng thuốc trừ cỏ.
- Các mẫu ựược nhuộm X-Gluc có màu xanh chàm ựặc trưng của gen gus chứng tỏựã có mặt gen chỉ thị gus trong mẫu.
- Kết quả chạy PCR với cặp mồi ựặc hiệu promoter 35S ựã thu ựược các dòng D1, D3, D4, D5, D7, D8, D9, D17 cho kết quả PCR dương tắnh. Bước ựầu khẳng ựịnh các dòng ựồng tiền này mang gen cần chuyển.
3. đánh giá vật liệu chuyển gen thành công qua Biotest
- Kết quả thử nghiệm với 6 loại sâu thuộc bộ cánh vảy Lepidotera (sâu xanh da láng, sâu xám, sâu khoang, sâu xanh ựục quả, sâu xanh sọc trắng và sâu tơ) ựã chọn lọc ựược ựối tượng sâu khoang là sâu hại ăn lá ựồng tiền thắch hợp cho biotest kháng sâu.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ76
- Cây ựồng tiền ựã chuyển gen ở các dòng D1, D3, D4, D5, D7, D8, D9 thể hiện ựặc tắnh kháng sâu khoang, sâu ăn lá các dòng này bị chết trong vòng 9 ngày, tập trung ở ngày thứ 3 ựến ngày thứ 5, trong khi sâu ựối chứng vẫn tồn tại 100%. Khẳng ựịnh các dòng ựồng tiền này ựã mang gen cryIAc kháng sâu bộ cánh vảy.
5.2 đề nghị
1. Tiến hành nhân nhanh các dòng ựồng tiền chuyển gen
2. đưa các dòng ựồng tiền chuyển gen ra vườn ươm ựể theo dõi sinh trưởng, phát triển.
3. Tiếp tục theo dõi khả năng kháng sâu ở các ựời sau của các dòng D1, D3, D4, D5, D7, D8, D9.
4. Test kháng sâu dòng D17.
5. Thuần dưỡng sâu thuộc bộ cánh vảy từ tuổi 1 ựể test kháng sâu ựảm bảo ựộựồng ựều.
6. Test kháng thuốc trừ cỏ.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ77