T-ADN ñược giới hạn hai ñầu bởi vùng biên (T-ADN borders), phần còn lại trong vùng biên sẽ không có chức năng gì trong quá trình chuyển gen. Nhờ vậy, có thể loại bỏ khả năng gây hại của T-ADN bằng cách thay các gen tạo khối u (oncogenes) nằm trong hai ñầu vùng biên bằng các gen mong muốn. Khi các oncogene bị loại bỏ, tế bào hoặc mô thực vật chuyển gen sẽ
phát triển bình thường và trong hầu hết các trường hợp, cho cây hữu thụ. Quá trình tổng hợp opine sử dụng các nguyên liệu của cây làm ảnh hưởng ñến năng suất cuối cùng nên trong quá trình thiết kế cũng loại bỏ các gen tổng hợp opine. Ti-plasmid có kích thước lớn (200-800 kb) nên những ñoạn ADN không cần thiết cũng phải ñược cắt bỏ ñể chèn vào ñoạn ADN mục tiêu. Ngoài ra, Ti-plasmid không tự tái bản trong E.coli nên cần ñược bổ sung thêm gốc tái bản của E.coli. Cuối cùng, cần bổ sung các gen chỉ thịñể chọn lọc cây và vi khuẩn. [12]
Như vậy, cấu trúc của một vector chuyển gen bao gồm: 1- Gốc tái bản (ORI) có nguồn gốc từ vi khuẩn.
2- Vùng khởi ñộng (promoter) có nguồn gốc từ thực vật. 3- Vùng kết thúc (terminator).
4- Vùng cắt ñặc hiệu của RE (enzyme cắt giới hạn). 5- Vùng gắn gen chuyển vào (MCS).
6- Vùng chứa gen chọn lọc (ñể tách các tế bào chuyển gen).
7- Vùng chứa các gen báo cáo ñể biết ñược các gen chuyển vào có thành công không (GUS, gfp). [5]
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………20
Hình 2.4. Cấu trúc vector chuyển gen pCAMBIA