3.3.1 Dụng cụ thí nghiệm
- Gồm 3 ao hình chữ nhật, mỗi ao có diện tích là 1000m2, cốc ñong, xô, ca, lọ ñựng mẫu, vợt lọc và chậu.
- Dụng cụ thu mẫu: Lưới thu mẫu ñộng vật phù du hình nón may bằng vải lụa (lưới chuyên dùng ñể thu mẫu ñộng vật phù du). Lưới hình nón, ñường kính miệng lưới 20cm, chiều cao lưới 40 - 50cm, cỡ mắt lưới 50µm. Cấu tạo gồm 3 phần:
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………30
Phần miệng lưới: Gồm vành ñai miệng tiếp xúc là vải bao hình chóp cụt. Vòng
ñai miệng ñược nối với dây kéo lưới, còn vải hình chóp nối với thân lưới.
Phần lọc nước : Thân lưới có chiều dài gấp 2-3 lần ñường kính miệng. ðược làm bằng vải ñặc biệt có mắt lưới là 50 µm, có khả năng thoát nước nhanh. Thân lưới nối với miệng bằng vòng ñai lưới và nối với ống ñáy qua một tầng vải.
Ống ñáy: Làm bằng ống nhựa có khoá ñiều chỉnh ñóng mở ñể lấy mẫu ra.
- Kính hiển vi, buồng ñếm ñộng vật phù du, ñồng hồñếm, nhiệt kế, khúc xạ kế, máy ño pH v.v
- Dụng cụ giải phẫu: kim giai phẫu, panh, hộp lồng, ..
- Các hoá chất: formaline, hoá chất môi trường nuôi cấy tảo...
Hình 3.2 Kính hiển vi và dụng cụ phân tích mẫu
3.3.2 Vật liệu nghiên cứu
Thức ăn sử dụng trong thí nghiệm bao gồm: phân vi sinh, cá tạp, bột cá kết hợp cám gạo.
+ Cá tạp: Nguồn cá tạp ñược mua từ các tàu ñánh cá, cá mua vềñược rửa sạch, nấu chín, sau ñó cá ñược xay nhuyễn và ủ với 1,5lít chế phẩm Super VS. Khi sử dụng hoà với nước tạt ñều khắp ao. Mỗi ao thí nghiệm dùng 10kg và ñược chia làm 2 lần trong suốt quá trình thí nghiệm. Thí nghiệm lặp lại 3 lần với số lượng cá sử dụng là 30
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………31
kg/3ao thí nghiệm.
+ Phân vi sinh: sản phẩm phân vi sinh dùng làm nguyên liệu tốt nhất nhờ quá trình lên men từ dịch thể vi sinh vật tạo thành, bao gồm nhiều loại vi khuẩn nhỏ và có ích. Thành phần của phân vi sinh gồm: N, P, K, nguyên tố vi lượng và các loại vi sinh vật hữu ích. Sản phẩm phân vi sinh có xuất xứ từ Trung Quốc ñược ñóng bao với liều lượng 2,5kg/túi.
Tác dụng của phân vi sinh: làm cho các loại tảo ñơn bào trong ao phát triển mạnh và tạo môi trường nước có chất lượng tốt. Ngoài ra, phân vi sinh còn làm thức ăn trực tiếp cho tôm và cá. Khi sử dụng hoà vào nước, sau ñó cung cấp ñều khắp các ao thí nghiệm. Mỗi lần thí nghiệm sử dụng 5 gói với hàm lượng là 10kg chia làm 2 lần trong quá trình thí nghiệm. Thí nghiệp lặp 3 lần với liều lượng sử dụng là 30kg/3ao thí nghiệm.
+ Bột cá kết hợp cám gạo hoà cùng 40l nước, sau ñó ủ với 1,5l chế phẩm Super VS. Khi sử dụng khuấy ñều và tạt khắp xung quanh ao. Liều lượng sử dụng là 10kg và chia làm 2 lần. Thí nghiệm lặp lại 3 lần với liều lượng sử dụng là 30kg/3ao thí nghiệm
3.3.3 Thiết kế thí nghiệm
Thí nghiệm ñược bố trí trong 3 ao với mỗi công thức có 3 lần lặp theo các thời gian từ ñầu tháng 5 ñến tháng 8. Thí nghiệm ñược bố trí trong ao ñất với ñiều kiện nguồn nước lấy vào từ mương dẫn nước Thuỷ Giang.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………32 CT1 CT2 CT3 CT4 Ao 1 Ao 2 Ao 3 Ao1 Ao 2 Ao 3 Ao 1 Ao 2 Ao3 Ao 1 Ao 2 Ao 3 Thí nghiệm lặp 3 lần Thí nghiệm lặp 3 lần Thí nghiệm lặp 3 lần Thí nghiệm lặp 3 lần
Sơñồ 3.1 Bố trí thí nghiệm với các công thức thức ăn khác nhau
Chú thích: CT1: Sử dụngphân vi sinh
CT2: Sử dụngcá tạp
CT3: Sử dụng bột cá kết hợp bột cám gạo
CT4: Thí nghiệm ñối chứng (ñể tảo phát triển tự nhiên trong ao) - ðiều kiện thí nghiệm chung trong ao ñất:
+ Thí nghiệm tiến hành trong 3 ao, mỗi ao có diện tích 1000m2 + ðộ sâu mực nước: 1m
Các chỉ tiêu ñánh giá:
• Thành phần giống loài phát triển trong các công thức thí nghiệm (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
• Tỷ lệ các giống loài phát triển trong các công thức thí nghiệm (%)
• Thời gian phát triển (ngày)
• Thời gian duy trì mật ñộ cao (ngày) • Mật ñộ cực ñại(ct/l)
Nguồn nước có mang theo ñộng vật phù du (Copepoda và Rotifer) vào các ao thí nghiệm
Thu mẫu ðVPD ở
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………33
+ Cải tạo ao cấp nước và gây màu nước - Thí nghiệm ñược lặp lại 3 lần theo thời gian
3.3.4 Phương pháp thu và phân tích mẫu vật
3.3.4.1 Phương pháp thu và phân tích mẫu ñịnh tính
Nhằm xác ñịnh ñầy ñủ các giống loài Rotatoria và Copepoda phát triển trong ao nuôi có các công thức chăm bón khác nhau, chúng tôi thực hiện các bước sau:
- Nguồn nước ñược lấy từ kênh dẫn nước Thủy Giang trong ñó có nguồn giống
ñộng vật phù du (Copepoda và Rotatoria). Trước khi lấy nước vào ao, nước ñược lọc qua lưới chắn ñể loại bỏ rác và các sinh vật có có kích cỡ lớn.
- Tiến hành gây màu tuỳ theo công thức thí nghiệm mà sử dụng loại thức ăn khác nhau ñể kích thích quá trình sinh trưởng và phát triển của các loài ñộng vật phù du trong ao. Tiến hành thu mẫu xác ñịnh thành phần giống loài ðộng vật phù du trong ao.
- Phương pháp thu mẫu: Tiến hành thu 2 mẫu tại các ao thí nghiệm, mỗi ao thí nghiệm thu ñịnh kỳ 10 ngày/lần.
- Thời gian thu mẫu từ 6h sáng ñến 7h sáng trong ngày
- Vị trí thu mẫu: Dùng vợt có kích thước mắt lưới 50 µm kéo lọc ñộng vật phù du ở nhiều ñiểm khác nhau trong mỗi ao thí nghiệm.
- Xử lí mẫu: mẫu ñịnh lượng và ñịnh tính ñược xử lí bảo quản trong dung dịch Formaline 3 - 4%
- Phương pháp phân loại tới loài dựa vào nguyên tắc sau: + Xác ñịnh các ñặc ñiểm phân loại của từng loài
+ ðo kích thước cơ thể
+ Dựa vào phân bốñịa lí của chúng
- Dùng ống hút lấy 1-2 giọt mẫu cho vào la men sau ñó ñậy la men lên trên và quan sát dưới kính hiển vi. Mẫu ñược xác ñịnh lặp ñi lặp lại 3-4 lần.
- Phân tích mẫu ñịnh tính bằng phương pháp quan sát hình thái dưới kính hiển vi quang học OLYMPUS vật kính có ñộ phóng ñại 4,10 và 40 lần. ðịnh danh loài sử
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………34
dụng các tài liệu sau:
+ Nguyễn Văn Khôi (2001), ðộng vật chí Việt Nam(tập 9). Phân lớp chân mái chèo – Copepoda, biển.
+ ðặng Ngọc Thanh, Phạm Văn Miên và Thái Trần Bái(1980). ðịnh loại ñộng vật không xương sống nước ngọt Bắc Việt Nam.
+ ðặng Ngọc Thanh, Hồ Thanh Hải(2001), ðộng vật chí Việt Nam(tập 5). Walter koste(1978), Rotatoria.
3.3.4.2 Phương pháp thu và phân tích mẫu ñịnh lượng
- Kiểm tra mật ñộ ban ñầu và theo dõi sự gia tăng mật ñộ trong quá trình nuôi. - Tiến hành thu 3mẫu/lần/ngày trên 3 ao thí nghiệm, mẫu thu xong ñược cốñịnh bằng dung dịch Formaline 3- 4%.
- Vị trí thu mẫu: mỗi mẫu thu tại nhiều vị trí khác nhau trong ao. Tùy theo mật (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
ñộ ðVPD trong ao mà thể tích mẫu thu khác nhau, khi mật ñộ ðVPD trong ao thưa thì mỗi mẫu thu 10l.
- Mẫu ñược thu bằng lưới thu ñộng vật phù du, lấy 10 lít nước mẫu lọc qua lưới thu ñộng vật phù du
- Mẫu thu xong ñược cô ñặc còn lại thể tích là 100ml sau ñó cốñịnh bằng dung dịch Formaline 3 - 4%.
- Phân tích mẫu: Trước khi phân tích mẫu phải lắc nhẹ mẫu ñể ñộng vật phù phân bố ñều sau ñó dùng ống hút lấy 3 lần/ mẫu, mỗi lần lấy 1ml. Mẫu ñược ñưa vào buồng ñếm và quan sát trên kính hiển vi. Nếu mật ñộ quá dầy thì hoà loãng ra ñếm.
- Xác ñịnh mật ñộ ñộng vật phù du trong ao bằng phương pháp ñếm cá thể của Konvic, 1905. Dùng buồng ñếm ñựng mẫu và ñếm các cá thể ñộng vật phù du dưới kính hiển vi.
- Mật ñộ ðVPD ñược xác ñịnh theo công thức tính sau:
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………35
Xcon/l =
Trong ñó A : lượng nước lọc (lit) B : lượng nước cô ñặc(ml) C : thể tích nước ñem ñếm (ml) D : số cá thểñếm ñược
- Tính mật ñộ trung bình của Copepoda và Rotifer bằng công thức 1 D = x (D1 + D2 + ..Dn) n D : mật ñộ cá thể trung bình Dn : mật ñộ cá thểñếm ñược ở lần ñếm thứ n n : số lần ñếm - Công thức xác ñịnh tỷ lệ % các thành phần trong một mẫu fi =
Trong ñó fi : Tỷ lệ % loài i ñược xác ñịnh trong mẫu tổng thể
ni: Số lượng cá thể loài i trong mẫu tổng thể
N: Tổng số cá thể trong mẫu phân tích Theo dõi các yếu tố môi trường
- Xác ñịnh nhiệt ñộ trong quá trình thí nghiệm bằng nhiệt kế
- ðộ mặn ñược xác ñịnh bằng khúc sạ kế - Xác ñịnh pH bằng máy ño DxB AxC ni*100 N
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………36
3.4 Xử lý số liệu
- Sử dụng phần mềm Excell ñể tính các giá trị trung bình, ñộ lệch chuẩn, sai số
chuẩn và phương sai.
- Vẽ các ñồ thị, bảng biểu thể hiện thành phần loài và mật ñộ theo thời gian và không gian.
- Phân tích phương sai 1 nhân tố so sánh sự khác nhau giữa các công thức thí nghiệm sử dụng phần mềm SPSS và tiêu chuẩn LSD0,05
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………37
CHƯƠNG4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
4.1 Một số yếu tố môi trường trong quá trình thí nghiệm
Thí nghiệm ñược tiến hành trong ao ñất, thí nghiệm ñược tiến hành từ tháng 5 - 8 ñiều kiện thời tiết khí hậu phụ thuộc vào ñiều kiện môi trường tự nhiên. Hàng ngày tiến hành theo dõi một số yếu tố môi trường trong các ao thí nghiệm.
Bảng 4.1 Một số yếu tố môi trường trong thời gian thí nghiệm Yếu tố môi trường Tháng Nhiệt ñộ (T oC) ðộ mặn (‰) pH 5 28,69 ± 0,41 20,54 ± 0,18 7,78 ± 0,07 6 30,75 ± 0,34 17,75 ± 0,65 8,21 ± 0,07 7 31,96 ± 0,19 14,96 ± 0,19 8,18 ± 0,05 8 31,02 ± 0,24 13,41 ± 0,13 7,42 ± 0,04 Sự phát triển của ðVPD phụ thuộc rất nhiều vào các yếu tố môi trường, yếu tố
có ảnh hưởng lớn ñến sự phát triển của ñộng vật phù du như: nhiệt ñộ, ñộ mặn, pH...
Nhiệt ñộ
Trong thời gian thí nghiệm nhiệt ñộ biến ñộng trong khoảng 28,69 - 30,02, nhiệt ñộ chênh lệch giữa buổi sáng và buổi chiều chênh lệch từ 1- 3 ñộ tuỳ theo các thời gian thí nghiệm trong năm, nhiệt ñộ cao nhất vào tháng 7 và thấp nhất vào tháng 5 (xem bảng 4.1). Sự chênh lệch nhiệt ñộ giữa buổi sáng và buổi chiều chủ yếu do sự
thay ñổi cường ñộ chiếu sáng của mặt trời. Vậy biến ñộng nhiệt ñộ trong các ao thí nghiệm thích hợp cho sự phát triển của các sinh vật phù du. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
ðộ mặn
Trong thời gian thí nghiệm khoảng ñộ mặn dao ñộng lớn từ 13,41 - 20,54‰, ñộ
mặn trong tháng 5 cao nhất và giảm dần qua các tháng tiếp theo do ảnh hưởng của nguồn nước mưa trong nội ñịa chảy ra nên ñộ mặn giảm. Theo Vũ Trung Tạng (1994) vùng cửa sông là nơi chuyển tiếp giữa sông và biển nên ñộ muối biến ñộng lớn. Vì vậy với khoảng biến thiên ñộ mặn này chỉ có thể thích hợp với những loài ñộng vật phù du rộng muối mới có thể sinh trưởng và phát triển bình thường.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………38
pH
Giá trị pH trong các tháng thí nghiệm dao ñộng trong khoảng 7,42 - 8,21, pH cao nhất vào tháng 6 và thấp nhất vào tháng 8. Giá trị pH trong ao thí nghiệm biến ñộng trong ngày, pH thấp vào buổi sáng và cao hơn vào buổi chiều. Sự biến ñộng của pH có liên quan ñến sự biến ñộng nhiệt ñộ, sự biến ñộng nhiệt ñộ kéo theo sự biến ñộng mật
ñộ tảo trong ao từñó sẽ dẫn ñến sự thay ñổi pH trong ao nuôi.
4.2 Thành phần giống loài Copepoda và Rotifer trong các công thức thí nghiệm
Thành phần giống loài Copepoda trong tự nhiên khá ña dạng. Các loài phân bố
phụ thuộc vào vị trí ñịa lí, ñặc ñiểm tự nhiên, môi trường sống và thời gian trong năm. Qua phân tích mẫu ñịnh tính thu ñược trong các ao gây nuôi làm thức ăn tự nhiên tại khu vực Trạm nước lợ - Quý kim - Hải Phòng trong thời gian tiến hành luận văn chúng tôi ñã xác ñịnh ñược 4 loài Copepoda và 1 loài Rotifer.
Bảng 4.2 Thành phần giống loài trong các công thức thí nghiệm Các công thức gây màu khác nhau
STT Loài CT1 CT2 CT3 ðối chứng 1 Acartia clausi + + + + BộCalanoidae HọAcartidae 2 Acartia pacifica + + + + BộCalanoidae HọAcartidae 3 Schmackeria dubia + + + + BộCalanoidae HọPseudiaptomidae 4 Oithona simplex + + + + BộCyclopoida HọOithonidae 5 Brachionus plicatilis + + + + Chú thích :'' +'' bắt gặp loài
Từ kết quả bảng 4.2 cho thấy, trong ao có sử dụng phân bón và không sử dụng phân ñều xác ñịnh ñược 4 loài Copepoda thuộc 3 họ và 2bộ; 1 loài luân trùng thuộc giống Brachionus, họ Brachionidae và bộ Monogononta. Do ñiều kiện tự nhiên của
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………39
vùng Quý Kim mang tính chất vùng nước lợ cửa sông nên thành phần ñộng vật phù du mang nét ñặc trưng của vùng nước lợ. Theo Nguyễn Văn Khôi (2001) Schmackeria dubia, Acartia pacifica, Brachionus plicatilis... là loài nước lợ ñiển hình, chúng phân bố tại vùng nước lợ ven bờ và ñược xếp vào hệ thống phân loại như sau:
1.Acartia clausi
Ngành chân khớp: Arthropoda
Ngành phụ có hàm: Mandibulata
Lớp giáp xác: Crustacea J.Lamarck,1801
Phân lớp chân mái chèo: Copepoda M.Milne Edwards,1834-1840
Bộ: CalanoidaSars,1902
Họ: Acartidae Dana,1846
Giống: AcartiaDana,1846
Loài: Acartia clausiGiesbrecht,1889
ðặc ñiểm phân loại: Con trưởng thành có chiều dài 0,92- 1,17 mm
Con cái:
ðầu ngực hình trứng dài. Trước trán tù tròn. Góc bên sau ngực tù tròn. Bụng có 3 ñốt, ñốt sinh dục dài hơn hai ñốt sau cộng lại. Chiều dài chạc ñuôi gấp hai lần chiều rộng.
Chân ngực V một nhánh, ñối xứng, ñốt 2 hình chữ nhật, ñỉnh ngoài có 1lông dạng lông chim dài hơn ñốt ñỉnh, ñốt ñỉnh dạng gai, hơi cong và có lông nhỏ.