T ủa dịch chiết enzym vừa thu được bằng cồn 960 theo tỉ lệ 1:3 (thể tích dịch chiết enzym/ thể tích cồn 960, giữ lạnh trong 15 phút, sau đó li tâm hỗn hợp trên hu nhận chế phẩm enzym lắng ởđáy ống l
3.9. THU NHẬN PECTINASE THÔ TỪ CANH TRƯỜNG NUÔI CẤY HAI CHỦNG VI KHUẨN
BACILLUS
Tiến hành nuôi cấy hai chủng vi khuẩn Bl2 và Bs4 trên môi trường bán rắn theo mục 2.3.3, ở các
điều kiện nuôi cấy tối ưu theo mục 3.7. Quá trình tách chiết enzym được thực hiện theo mục 2.3.4. Quá trình tủa enzym bằng cồn lạnh được thực hiện theo mục 2.3.7. Kết quảđược trình bày trong bảng 3.24.
Bảng 3.19: Kết quả thu nhận enzym thô
Bl2 Bs4
Khối lượng canh trường(g) 150 150
Tổng hoạt tính(UI) 108 071,7 102 472,8
Tổng khối lượng trước khi sấy(g) 12,17 10,34
Tổng khối lượng sau khi sấy(g) 7,12 6,53
Tỉ lệ thu nhận chế phẩm pectinase/ canh trường (%) 4,75 4,35
Tổng hoạt tính(UI) 78 421,15 73 306,93
Hiệu suất(%) 72,56 71,54
Hiệu suất thu hồi pectinase thô ở chủng Bl2 đạt 72,56%, ở chủng Bs4 đạt 71,56% tổng hoạt tính. Có thể giải thích nguyên nhân làm cho hiệu suất thu hồi không cao là:
i) Nguyên nhân từ thiết bị. Do hạn chế về thiết bị nên chúng tôi phải li tâm bằng máy li tâm thường ở nhiệt độ phòng với dung dịch kết tủa đã được làm lạnh trước. Sau khi li tâm, nhiệt độ
tăng lên. Đấy có thể là một nguyên nhân gây biến đổi enzym trong quá trình li tâm làm giảm hoạt tính của tủa enzym.
ii) Nguyên nhân từ hiệu suất thu hồi của phương pháp kết tủa bằng cồn. Do thời gian có hạn nên chúng tôi chỉ thực hiện tủa enzym ở tỉ lệ 3 cồn/1 dung dịch chiết enzym. Đây là tỉ lệ tham khảo từ các đề tài nghiên cứu thu nhận và tinh sạch enzym pectinase khác. Chúng tôi chưa nghiên cứu sâu về vấn đề này. Vì vậy kết quả này chưa phải là kết quả tối ưu để tủa petinase từ canh trường nuôi cấy Bl2 và Bs4.
iii) Các enzym sau khi tủa hoặc tinh sạch có xu hướng kết tụ lại. Điều này ảnh hưởng rất nhiều đến hoạt tính ủa enzym do các trung tâm phản ứng bị vùi lấp vào bên trong và không phục hồi được sau khi hoà tan trở lại.