- F18: F18 là tên ựặt cho nhân tố bám dắnh 8813 Bởi vậy, một loại fimbriae mới ựã ựược ựề nghị công nhận là F18ab, F18ac (Rippinger và cs,
3.4.3Phương pháp xác ựịnh serotype kháng nguyê nO của các chủng vi khuẩn Ẹcoli phân lập ựược
3. đỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.3Phương pháp xác ựịnh serotype kháng nguyê nO của các chủng vi khuẩn Ẹcoli phân lập ựược
khuẩn Ẹcoli phân lập ựược
được thực hiện theo phương pháp ngưng kết nhanh trên phiến kắnh; các chủng vi khuẩn ựược tiến hành xác ựịnh nhóm với các huyết thanh ựa giá trước, sau ựó ựến các huyết thanh ựơn giá trong nhóm.
- Chuẩn bị:
+ Chủng vi khuẩn Ẹcoli cần xác ựịnh serotype ựược cấy trên thạch máu cừu, ủ ở tủ ấm 370C trong 18 - 24 giờ.
+ Các kháng huyết thanh O chuẩn (ựa giá và ựơn giá) do hãng Denka, Seiken Cọ, Ltd, Niigata, Nhật cung cấp.
+ Nước muối sinh lý 0,85%, phiến kắnh sạch, que cấy nhựạ
- Phương pháp tiến hành phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kắnh như sau:
Nhỏ lên phiến kắnh sạch, mỗi ựầu một giọt nước muối sinh lý, dùng que cấy vô trùng, lấy khuẩn lạc Ẹcoli cần xác ựịnh ựã ựược nuôi trên môi trường thạch máu, trộn ựều với 2 giọt nước muối sinh lý ựể tạo thành huyễn dịch vi khuẩn. Nhỏ một giọt kháng huyết thanh chuẩn vào một bên huyễn dịch và một giọt nước sinh lý vào bên huyễn dịch còn lại (ựối chứng). Nếu có phản ứng ngưng kết, sẽ xuất hiện trong vòng 30 giâỵ Phản ứng dương tắnh khi hình thành ngưng kết giữa kháng nguyên là vi khuẩn với kháng huyết thanh, tạo thành những hạt nhỏ trắng lấm tấm, huyễn dịch tách ra làm 2 phần là các hạt ngưng kết và phần nước trong. Với phản ứng ngưng kết xảy ra nhanh, rõ rệt thì ựược ựánh giá mức ++++. Tùy theo khả năng ngưng kết ựể có thể ựánh giá mức ngưng kết ở các mức ựộ khác nhau +, ++, +++. Phản ứng là âm tắnh khi hỗn dịch vi khuẩn với kháng huyết thanh ựục ựều như bên ựối chứng.
Với những chủng có ngưng kết với kháng huyết thanh ựa giá, tiếp tục thực hiện như vậy với các kháng huyết thanh ựơn giá thuộc nhóm ựể xác ựịnh
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 35
rõ từng serotypẹ Trong trường hợp các chủng có hiện tượng ngưng kết chéo với nhiều nhóm hoặc ngưng kết với nhiều ựơn giá khác nhau, thì phải pha loãng kháng huyết thanh theo cấp số 2, kết quả sẽ lấy ngưng kết ở cấp số pha loãng cao nhất.