V ới vi sinh vật gây bệnh
c. Phương pháp ñặt vòng khâu của Heathey
Chuẩn bị vòng khâu kim loại ñường kính 8mm, chiều cao 9 ñến 10mm, hộp lồng loại ñường kính 10cm ñã ñổ thạch gồm 02 loại thạch là thạch nền và thạch tráng (thạch mặt).
Thạch nền: ðặc hơn thạch tráng ñược nấu trong môi trường canh thang có thêm muối NaCl. So với thạch tráng nồng ñộ chất dinh dưỡng thạch nền ít hơn. Thạch này sau khi ñã hấp thanh trùng ñun nóng chảy trở lại, ñối với ñường kính = 10 cm, ta ñổ khoảng 10 ñến 12 ml thạch, chờñông, bảo quản tủ lạnh dùng dần. Lớp thạch nền chắc hơn dày hơn ở phía dưới.
Thạch tráng (thạch mặt): Thạch ñảm bảo ñúng, ñủ thành phần các chất dinh dưỡng ñể vi khuẩn phát triển ñược như huyết thanh, gluco, các acid amin, vitamin,... nếu như vi khuẩn thí nghiệm yêu cầu, lắc ñều thanh trùng, ñun nóng chảy hết, ñể nguội 46 – 48 oC rồi cho vi khuẩn cần thử vào lắc ñều chia ra các ñĩa. Cứ 25 ml thạch tráng cho thêm 0,5ml canh trùng thí nghiệm, sau khi cấy 24 giờñể tủ ẩm, lắc thật ñều, chia từng ñĩa, mỗi ñĩa tùy theo kích thước cho thêm 8 – 10 ml thạch tráng ñã có vi khuẩn, tráng khắp mặt ñĩa. Lớp thạch tráng mỏng hơn, lỏng hơn, ñã có vi khuẩn cần thửở phía trên.
Sau khi lớp thạch trên ñã ñông lại ta tiến hành khâu sâu khoảng 1 ñến 2 mm. Với tỏi ngâm 2 giờ: Dùng 5 vòng khâu, 4 vòng khâu ñặt xung quanh gồm: Tỏi ngâm dấm, tỏi ngâm rượu,tỏi ngâm nước cất và 1 vòng khâu ñối chứng dùng nước cất.
Với tỏi ngâm 4 tháng: dùng 4 vòng khâu, 4 góc gồm tỏi ngâm giấm, tỏi ngâm rượu, và 1 vòng khâu ñối chứng dùng nước cất.
Sau khi ñặt vòng khâu, tiến hành nhỏ các dịch chiết và ñối chứng vào vòng khâu, mỗi loại với lượng bằng nhau từ 0,1 ml. ðể tủ lạnh 6 ñến 8 giờ cho chất kháng sinh khuếch tán ra lớp thạch mặt, nhưng vi khuẩn chưa mọc. Sau ñó, hộp lồng trong tủấm 37 oC trong 24 giờ lấy ra ñọc kết quả (ño ñường kính vòng vô khuẩn).
Ưu ñiểm của phương pháp là ñơn giản, an toàn và ñảm bảo ñộ chính xác. Trong lúc chuẩn bị mẫu thử còn lẫn một số vi khuẩn khác, ống khâu sẽ giữ vi khuẩn không cho khuếch tán ra ngoài. Nếu ống khâu ñảm bảo tiêu chuẩn quy ñịnh, chỉ phytoncid ñược thẩm thấu vào thạch, rồi ức chế sự phát triển hay tiêu diệt vi khuẩn. Kích thước vòng vô khuẩn to, nhỏ tùy thuộc tác dụng dược lý mạnh hay yếu của phytoncid cần thử.
3.3.2. Thử nghiệm phòng, trị bệnh LCPT
Chọn những ñàn lợn có thời gian ñẻ gần giống nhau, ñược nuôi dưỡng cùng 1 dãy chuồng, có ñiều kiện khí hậu, chếñộ chăm sóc, chếñộ nuôi dưỡng mẹ và con là như nhau. Ở mỗi ô thí nghiệm lợn ñược ñánh dấu (cắt số tai) ñể chia thành các ô tiện cho việc theo dõi.
Cân khối lượng sơ sinh (ngay sau khi ñẻ ra chưa bú sữa ñầu) và cân khối lượng sau cai sữa (buổi sáng ngày 21 trước khi cho ăn).
+ Phòng bệnh LCPT từ sơ sinh ñến 21 ngày tuổi bằng 2 loại chế phẩm tỏi bảo quản trong 04 tháng .
Lịch phòng cụ thể:
Cho lợn con uống các chế phẩm vào buổi sáng các ngày thứ nhất - thứ 5 - thứ 9 - thứ 13 - thứ 17 - thứ 21. uống ngày 1 lần.
Liều lượng: Tuần 1cho uống 0,5ml/con. Tuần 2 cho uống 1 ml/con.
Tuần 3 cho uống 1,5 ml/con. Các chỉ tiêu theo dõi:
- Số con mắc bệnh và tỷ lệ mắc bệnh tương ứng.
- Ảnh hưởng của tỏi ñến khả năng tăng trọng của lợn con dưới 21 ngày tuổi. + ðiều trị bệnh LCPT từ sơ sinh ñến 21 ngày tuổi bằng 2 loại chế phẩm tỏi bảo quản trong dung môi dấm, rượu rong 4 tháng. liều lượng gấp ñôi liều phòng. uống 2 lần /ngày. Liều lượng: Tuần 1 cho uống 1 ml/con/ngày. Tuần 2 cho uống 2 ml/con/ngày. Tuần 3 cho uống 3 ml/con/ngày. Liệu trình: Liên tục từ 3 ñến 4 ngày. Các chỉ tiêu theo dõi:
Số con khỏi bệnh và tỷ lệ khỏi bệnh (%). Thời gian ñiều trị trung bình (ngày).
Theo dõi tốc ñộ sinh trưởng của lợn con bằng cách cân trọng lượng lợn con vào sáng 21 ngày tuổi trước khi cho ăn.
+ Phương pháp xử lý số liệu:
Các số liệu thu ñược xử lý theo phương pháp thống kế sinh học bằng phần mềm Excel 2003, với ñộ tin cậy α=0,05.
SƠ ðỒ THÍ NGHIỆM
Baytril 0,5% (37 con)
Thí nghiệm 1
Bào chế và kiểm tra tác dụng kháng khuẩn của các chế phẩm tỏi trong phòng thí nghiêm : Thí nghiệm 2 Phòng bệnh LCPT bằng các chế phẩm tỏi (90 con) Tỏi ngâm dấm 1 ml (45 con) Tỏi ngâm rượu 1 ml (45 con) ðố(40 con) i chứng Thí nghiệm 3 Thử nghiệm ñiều trị LCPT sử dụng tỏi ngâm dấm, rượu (167 con) Tỏi ngâm dấm 2 ml (79 con) Thực trạng bệnh LCPT Tỏi ngâm rượu 2 ml (51 con)