V ới vi sinh vật gây bệnh
3. NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
NGHIÊN CỨU
3.1. Nội dung
3.1.1. Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của tỏi trong phòng thí nghiêm
+ Bào chê thử nghiệm các dạng chế phẩm tỏi củ nghiền nhỏ ngâm trong các dung môi thông dụng: Dấm - rượu theo tỷ lệ 1:1.
+ Xác ñịnh khả năng ức chế một số vi khuẩn của chế phẩm ngâm trong dung môi: Dấm - Rượu và nước chiết sau khi ngâm 2 giờ và sau 4 tháng.
Chúng tôi tiến hành thử ñịnh tính và bán ñịnh tính bao gồm phương pháp sau:
- Phương pháp thử các phytoncid bay hơi. - Phương pháp hệ nồng ñộ pha loãng. - Phương pháp dặt vong khâu của heathey.
3.1.2. Ứng dụng các chế phẩm của tỏi trong phòng, trị bệnh LCPT
3.1.2.1. Thực trạng bệnh LCPT tại trại
3.1.2.2. Tác dụng phòng bệnh LCPT của các chế phẩm tỏi nghiền nhỏ bảo quản trong 4 tháng trong các dung môi dấm và rượu.
3.1.2.3. Tác dụng trị bệnh LCPT của các chế phẩm tỏi nghiền nhỏ bảo quản trong 4 tháng trong các dung môi dấm và rượu.
3.2. Nguyên liệu nghiên cứu
3.2.1. Dược liệu: Dung dịch tỏi nghiền ngâm dấm, rượu, nước cất trong 2 giờ
Dung dịch tỏi bảo quản trong các dung môi dấm, rượu, trong 4 tháng do bộ môn Nội chẩn - Dược - ðộc chất, Trường ðại học nông nghiêp Hà Nội chế.
Liều lượng: liều phòng dùng 1ml chế phẩm, ñiều trị dùng 2ml chế phẩm tỏi ngâm trong 4 tháng.
3.2.2. Vi khuẩn và ñộng vật thí nghiệm
Vi khuẩn dùng trong phòng thí nghiệm là E.coli, Salmonella và
Staphynococcus do bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm, Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội cung cấp.
Lợn thí nghiệm là lợn con theo mẹ từ sơ sinh ñến 21 ngày tuổi tại trại Liên Hiệp - Văn Giang - Hưng Yên.
3.2.3. Dụng cụ thí nghiệm
Nhiều loại dụng cụ, máy móc trong phòng thí nghiệm bộ môn Nội chẩn - Dược - ðộc chất như tủ ấm, tủ sấy, buồng cấy vi khuẩn, máy ly tâm, máy hấp,... các loại ống nghiệm, ñĩa lồng, vòng khâu,...
3.3. Phương pháp nghiên cứu
3.3.1. Trong phòng thí nghiệm
+ Bào chế thử nghiệm 2 dạng chế phẩm: Tỏi nghiền nhỏ ngâm trong các dung môi dấm, rượu theo tỷ lệ 1:1.
Chúng tôi bào chế 2 dạng chế phẩm tỏi trên theo giáo trình "Bào chếñông dược" 2000 của Trường ðại học Y Hà Nội, Khoa Y học cổ truyền, và giáo trình "Kỹ thuật bào chế và sinh dược học các dạng thuốc" tập 1 và tập 2 (2004) của Bộ môn Bào chế trường ðại học Dược Hà Nội. Kiểm nghiệm ñịnh tính các dạng chế phẩm theo Dược ñiển Việt Nam 2002. Các dạng chế phẩm trên cần thêm 01 ñiều kiện nữa là phải phù hợp với ñiều kiện chăn nuôi ở Việt Nam.
Tỏi củ phơi khô, bóc vỏ già lấy phần ánh tỏi xay bằng máy xay sinh tố trong 02 phút ngâm với các dung môi dấm, rượu, bảo quản ở nhiệt ñộ phòng với tỷ lệ 1:1 như sau:
- 1kg tỏi củ + 1000ml dấm. - 1kg tỏi củ + 1000ml rượu.
Thời gian ngâm 4 tháng, sau ñó ñem ra lọc qua dây. Phần huyễn dịch thu ñược ñem ñiều trị thử nghiệm phòng trị bệnh LCPT tại trại Liên hiệp-Văn Giang- Hưng Yên.
ðối với nghiên cứu trong phòng thí nghiệm, phần huyễn dịch thu ñược ly tâm tốc ñộ 1000 vòng/15 phút, lấy nước trong.
Dùng phần nước trong ñã ly tâm ñem xác ñịnh nồng ñộ tối thiểu có tác dụng.
Chế các dịch chiết của tỏi không qua bảo quản dùng trong phòng thí nghiệm: nước chiết tỏi tỷ lệ 1/1.
+ Các phương pháp thử tác dụng của tỏi với vi khuẩn trong phòng thí nghiệm bao gồm :