II. Tổng quan tài liệu nghiên cứu
3.3.Nội dung nghiên cứu
- Chúng tôi tiến hành khảo sát một số chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa máu của bê HF và bê Jersey d−ới 6 tháng tuổi nuôi tại Trung tâm nghiên cứu bò và đồng cỏ Ba Vì - Hà Nội.
- Biện pháp phòng trị bệnh viêm phổi bê
Toàn bộ bê bị viêm phổi do Trung tâm quản lý đ−ợc nuôi theo chế độ phù hợp với lứa tuổi.
3.4. PHƯƠNG PHáP NGHIÊN Cứu
3.4.l. Các chỉ tiêu hệ hồng cầu
* Đếm số l−ợng hồng cầu (triệu/mm3 máu)
Nguyên tắc: Lấy máu ở tĩnh mạch cổ, đuôi hoặc tĩnh mạch tai và buổi sáng tr−ớc khi cho ăn, pha lotng đến 200 bằng dung dịch Hayem rồi đếm trên buồng đếm Newbauer, soi bằng kính hiển vi quang học.
- Dụng cụ: Kính hiển vi quang học, La men, ống hút pha lotng hồng cầu potain có chia vạch 0.5 - 101 có viên bi đỏ, buồng đếm Newbauer.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………38 - Hóa chất: Na2SO4 5g NACL 1g HgCL 0,5g Fushin 2 giọt N−ớc cất vừa đủ 200ml
Na2SO và NACl cùng hòa tan với n−ớc tạo thành dung dịch có áp suất thẩm thấu cân bằng với áp suất thẩm thấu trong hồng cầu do đó hồng cầu sẽ không bị vỡ, HgCL2 có tác dụng sát trùng, fushin làm cho dung dịch có màu hồng nhạt dễ phân biệt với dung dịch khác.
- Tiến hành: Dùng ống hút potain hút hồng cầu đến vạch 0,5 rồi tiếp tục hút dịch pha lotng đến vạch 101 (pha lotng 200 lần). Đảo đi đảo lại cho đều, chú ý đảo nhẹ nhàng để tránh va đập vỡ hồng cầu.
- Cách Đếm: Đếm số l−ợng hồng cầu trong 5 ô trung bình (4 ô ở 4 góc và 1 ô ở giữa), mỗi ô trung bình có 16 ô con. Đếm hồng cầu theo hình zíc sắc, chỉ đếm những hồng cầu ở bên trong, cạnh trên, cạnh bên phải của ô con.
- Cách tính:
+ Cạnh một ô vuông con bằng 1/20mm + Chiều cao một ô vuông con bằng 1/10mm + Thể tích ô vuông con bằng 1/400mm3
Gọi A là số l−ợng hồng cầu đếm đ−ợc trong 5 ô vuông trung bình N là số l−ợng hồng cầu có trong 1mm3 máu
N = (A x 4000 x 200 / [5 x6]) = A x 10000 (triệu/mm3 máu). * Định l−ợng huyết sắc tố:
Dùng ph−ơng pháp so màu bằng huyết sắc kế shali. Theo ph−ơng pháp hematin:
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………39 - Nguyên lý: Trong môi tr−ờng HCL máu tạo thành hematin axit có màu cà phê. Dùng ph−ơg pháp so màu bằng huyết sắc kế shali để tính l−ợng Hb (g%). - Dụng cụ: Huyết sắc kế shali, pipet shali có chia vạch 0,02ml, que khuấy bằng thủy tinh và ống hút.
- Hóa chất: HCL 0,1N ; Và n−ớc cất
Tiến hành: Dùng ống hút nhỏ HCl 0,1N vào ống huyết sắc kế tới vạch số 2, lấy máu bằng pipet shali đến vạch 0,2 sau đó lau sạch xung quanh rồi thổi nhẹ nhàng máu từ ống hút vào trong ống đt có sẵn axit. Dùng ống hút hút n−ớc cất nhỏ từ từ và ống đó, vừa nhỏ vừa khuấy đều cho đến khi màu của dung dịch trong ống t−ơng đ−ơng màu của hai ống chuẩn thì dừng lại đọc kết quả.
Đơn vị tính bằng (g%)
* Tỷ khối hồng cầu (Hematocrit): Theo ph−ơng pháp Wintrobe (1933) Nguyên lý: Máu lấy vào ống mao quản có đ−ờng kính 0,5mm (ống hematocrit) dùng nhựa bịt kín một đầu. Đem ly tâm trên máy TH-12 tốc độ 3000 vòng/phút, do tỷ khối của hồng cầu lớn hơn huyết t−ơng nên hồng cầu lắng xuống d−ới, số l−ợng hồng cầu sẽ chiếm một tỷ lệ nhất định.
- Dụng cụ: Máy ly tâm TH-12 3000vòng/phút, ống thủy tinh chia vạch đo hematocrit (ống Wintrobe), pipet paster, mao quản mảnh và dài.
- Hóa chất: Xitrat natri tinh thể.
- Tiến hành: Lấy máu đt chống đông bằng Xitrat natri, dùng pipet paster mao quản cho máu vào ống Wintrobe tới vạch 10. Làm hai ống hoặc nhiều hơn để tránh sai số, cho máu vào li tâm 3000 vòng/phút trong 30 phút ống thủy tinh sẽ tách ra làm hai phần: Huyết t−ơng ở trên và hồng cầu cầu ở d−ới. Đọc vạch t−ơng ứng với bề mặt hồng cầu cầu nó sẽ cho tỷ lệ 1/10 của ống, nên muốn tính tỷ lệ phần trăm giữa khối l−ợng hồng cầu cầu và máu toàn phần có thể cộng lấy số trong bình của các ống sau đó nhân với 10. Đơn vị tính là %.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………40 Làm theo ph−ơng pháp Wintrobe (1929) và Bạch Quốc Tuyên (1978) Nồng độ huyết sắc tố trung bình của hồng cầu cầu là số huyết sắc tố có trong 100ml khối hồng cầu đt nén chặt. Đơn vị tính 1à g%. Công thức tính: NĐHSTTB = [Hb (g%) x 100]/Tỷ khối huyết cầu. Nồng độ này không bao giờ v−ợt quá 34g/100ml.
* L−ợng huyết sắc tố trung bình của hồng cầu (ng)
Là l−ợng huyết sắc tố bình quân chứa trong một hồng cầu. Kết quả tính theo công thức: LHSTTB = [ Hb (%)x 10] /số l−ợng hồng cầu (triệu/mm3)
Đơn vị tính là: nanogam (ng) (1g=1012 ng)
* Thể tích teung bình hồng cầu (àààmà 3)
Theo Wintrobe (1932, 1933, cải tiến năm 1969) ta có: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
V%
V-TBHC =
SLHC x 10
V-TBHC: Thể tích trung bình hồng cầu V%: Tỷ khối huyết cầu
* Diện tích trung bình hồng cầu (ààààm2) Theo Ponder (1927) và Wintrobe (1932)
πD2 4V
STBHC =
2 + D
Trong đó:
- STBHC: diện tích trung bình hồng cầu ((àm2) - D: đ−ờng kính trung bình của hồng cầu (àm)
- V: thể tích trung bình cảu hồng cầu ((àm3) - π = 3,14
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………41 * Bề dày hồng cầu ((àààmà )
Trong đó:
G: bề dày trung bình của hồng cầu R: bán kính hồng cầu
TBHC
V : Thể tích trung bình hồng cầu
* Chỉ số tròn hồng cầu (Is)
Là tỷ lệ giữa đ−ờng kính trung bình và bề dày hồng cầu.
Trong đó:
Is: chỉ số tròn hồng cầu D: đ−ờng kính hồng cầu(àm) G: bề dày hồng cầu (àm) * Tốc độ lắng máu (lắng hồng cầu)
Theo Panchenkov và Wartman (1946), thì nguyên lý máu đ−ợc chống đông bằng dung dịch Xitrat natri 3,8% để yên, các hồng cầu sẽ rơi xuống, sau đó đến bạch cầu, bên trên 1à huyết t−ơng. Tốc độ lắng hồng cầu đ−ợc đo bằng nghiên cứu độ rơi tự do của hồng cầu trong một cột máu của ống Panchenkov hoặc ống ly tâm Wintrobe có chia vạch đến 100 mm đt đ−ợc chống đông trên giá Panchenkov ở nhiệt độ phòng. Sau các mốc thời gian là 15, 30, 45 và 60 phút thì đọc kết quả. Đơn vị tính : mm/phút.
* Thời gian đông máu:
Lờy một giọt máu vừa đ−ợc lấy ở trong tĩnh mạch ra, rồi nhỏ lên mặt phiến kính sạch, lấy sợi tóc kéo ngang qua giọt máu, thấy keo sợi (giọt máu dính do đông máu làm sợi tóc bám vào) thì đọc kết quả bằng đồng hồ bấm giây.
* Hướng nhõn: TBHC V D = π x R2 D Is = G
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………42
Theo Schilling (1949) thỡ hướng nhõn ủược tớnh bằng tỷ số:
BCTT nhõn ấu + BCTT nhõn gậy Hướng nhõn =
BCTT nhõn ủốt
* Thế máu:
Thế máu là tỷ lệ giữa số l−ợng lâm ba cầu với bạch cầu trung tính nhân đốt. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Theo Nikitin, thế máu đ−ợc tính theo công thức:
BC Lympho Thế mỏu =
BCTT
3.4.2. Các chỉ tiêu hệ bạch cầu
* Đếm số l−ợng bạch cầu (nghìn/mm3)
- Nguyên tắc: Bạch cầu đ−ợc đếm trong buồng đếm Newbauer, máu đ−ợc pha lotng 20 lần trong ống hút bạch cầu bằng dung dịch pha lotng bạch cầu làm tan hồng cầu và giữ nguyên bạch cầu, soi trên kính hiển vi ta sẽ đếm đ−ợc số l−ợng bạch cầu.
Hóa chất: Dung dịch pha 1otng bạch cầu gồm: Axit axetic: 2-5ml
N−ớc cất: 100ml Xanh metylen: 2 giọt
Với hóa chất này thì axit axetic có tác dụng phá vỡ màng hồng cầu còn xanh metylen có tác dụng làm cho dung dịch có màu xanh để phân biệt.
- Tiến hành: Dùng ống hút bạch cầu, hút trực tiếp máu tĩnh mạch rìa tai hay tĩnh mạch đuôi vào buổi sáng lúc ch−a cho gia súc ăn và vận động cho đến vạch 0,1 tiếp đó hút đến vạch l1, các thao tác t−ơng tự nh− đếm số l−ợng hồng cầu.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………43 - Cách đếm: Đếm số l−ợng bạch cầu theo hình zíc zắc trên buồng đếm Newbauer ở 4 ô vuông lớn, mỗi ô có 6 ô trung bình.
- Cách tính: Cạnh một ô vuông trung bình bằng 1/4mm. Chiều cao 1 ô vuông trung bình bằng 1/10mm. Thể tích 1ô vuông trung bình bằng 1/160 mm3. Gọi B là số l−ợng bạch cầu đếm trong 4 ô vuông lớn, M là số l−ợng bạch cầu có trong 1mm3 máu.
- Công thức: M = (Bx160x20)/ (4x16) = Bx50 (nghìn/mm3)
* Phân loại bạch cầu:
Theo Macgregor (1940) và Nikolaep (1956). Trên tiêu bản máu nhuộm hai màu HEMATOXYLIN-EOSIN, Hematoxylin theo Delafield và Eosin Y (PRUDEN, 1885). Đọc trên kính hiển vi độ phóng đại 15x40. Theo cách phân loại của Shilling, đọc 200 bạch cầu. Đơn vị tính:%.
* Các chỉ tiêu về kích th−ớc tế bào máu:
Đo trực tiếp kích th−ớc tế bào máu trên kính hiển vi với th−ớc đo vật kính và thị kính.
- Đo kích th−ớc hồng cầu: đo khoảng 100 tế bào rồi lấy trị số trung bình. - Đo kích th−ớc bạch cầu: đo khoảng 50 tế bào.
3.4.3. Các chỉ tiêu sinh hóa máu
Trong thực tập và nghiên cứu, chúng tôi đt sử dụng máy phân tích các chỉ tiêu sinh hóa tại Cụng ty TNHH cụng nghệ và xột nghiệm y học Medlatec.
Xác định hàm l−ợng prơtein tổng số và tiểu phần protein huyết thanh bằng cách lấy huyết thanh rồi chạy bằng máy phân tích tại Cụng ty TNHH cụng nghệ và xột nghiệm y học Medlatec.
Đơn vị là :g/1.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………44 * Xác định hoạt độ enzyme GOT và GPT (theo ph−ơng pháp IFCC) trong máy phân tích tại Cụng ty TNHH cụng nghệ và xột nghiệm y học Medlatec.
+ Nguyên lý: Dựa theo phản ứng: GOT
α-Oxglutarate + L-aspartate L-Glutamate + Oxaloacetate MDH
Oxaloacetate + NADH + H+ L-malate + NAD+
+ Dụng cụ và hóa chất: Điều kiện thí nghiệm (factors) sử dụng ở 370C; Loại thuốc thử MPR1 (30x2ml); Đo mật độ quang ở chiều dài sóng: Hg 365mm; ống đo 1cm, nhiệt độ 370C, đo ng−ợc ánh sáng; Quang kế 4010.
+ Cách tiến hành: Lấy 0,2ml huyết thanh + 2ml thuốc thử MPR1 ở nhiệt độ 370C, lắc đều rồi cho vào máy đọc quang kế 4010, đọc trong l phút, đọc 3 lần, lấy kết quả cuối cùng.
+ Tính kết quả: Hoạt độ GOT trong huyết thanh đ−ợc tính theo công thức sau: U/L = 1746 x ∆∆340mm/phút.
Nồng độ thuốc thử ban đầu: TRIS: 88 mmol/1; pH = 7,8; L-aspartate: 246 mmol/1; MDH : 0,64 U/ml ; LDH = 0,66 U/ml ; NADH = 0,18 mmol/1; a- Oxơglutarate = 12mmol/1. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
* Xác định hoạt độ enzyme GPT
+ Nguyên lý phản ứng:
GPT
α-Oxglutarate + L-aspartate L-Glutamate + Pyruvat LDH
Pyruvat + NADH + H+ Lactate + NAD+
+ Dụng cụ và hóa chất, cách tiến hành, tính kết quả nh− xác định hoạt độ enzyme GOT.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………45 Nồng độ thuốc thử ban đầu: TRIS = 110mmol/1; pH = 7,3 ; L-Alanine = 550mmol/1; LDH = 1,3 U/ml; NADH = 0,198mmol/1; α-Oxoglutarale =16,5mmol/1
3.4.4. Ph−ơng pháp xử lý số liệu:
Kết quả thu đ−ợc chúng tôi xử lý theo ph−ơng pháp thống kê sinh học trên máy tính bằng phần mềm excel.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………46
IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. TèNH HèNH PHÁT TRIỂN ðÀN Bề CỦA TRUNG TÂM
4.1.1. Cơ cấu của ủàn bũ của Trung tõm qua cỏc năm
Theo thống kờ thỡ số lượng ủàn bũ qua 4 năm gần ủõy của trung tõm là:
Bảng 4.1. Số l−ợng bò của Trung tâm qua các năm ( 2005 – 2008)
Bò khai thác Bò hậu bị Bê
Năm Tổng đàn (con) Số l−ợng (con) Tỷ lệ (%) Số l−ợng (con) Tỷ lệ (%) Số l−ợng (con) Tỷ lệ (%) 2005 1029 520 50,33 187 18,17 322 31,30 2006 861 444 51,57 198 23,00 219 25,43 2007 969 489 50,46 236 24,36 244 25,18 8/2008 1011 537 53,12 206 20,38 268 26,50
(Số liệu thống kê của Trung tâm)
Trung tõm hiện quản lý 4 trại lớn và hơn 90 nụng hộ chăn nuụi bũ sữa khỏc. Với tổng ủàn bũ năm 2008 là 1011 con bũ.
Số lượng ủàn bũ qua cỏc năm là tăng. Với kinh nghiệm gõn 50 năm trong nghiờn cứu và cỏc cỏn bộ của trung tõm ủược ủi học nước ngoài về, trung tõm nghiờn cứu bũ và ủồng cỏ Ba Vỡ phấn ủấu là một trong 2 trung tõm lớn của toàn miền Bắc cú kinh nghiệm về chăn nuụi bũ sữa. Và là nơi cung cấp kỹ thuật cũng như nguồn bũ cho toàn khu vực.
Ngoài ra, cỏn bộ của trung tõm cũn chịu trỏch nhiệm giỳp ủỡ bà con ở cỏc vựng phụ cận về mặt kỹ thuật ủối với ủàn bũ khụng thuộc quản lý của trung tõm. Trong huyện, tổng ủàn bũ là 23.000con. Trong ủú cú 1.800 con bũ sữa, với 50% số lượng bũ sữa là của cỏc hộ gia ủỡnh. Sản lượng sữa của ủàn bũ ủạt 1800 tấn.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………47
4.1.2. Thức ăn, dinh dưỡng và biện phỏp giải quyết
Thức ăn cung cấp cho ủàn bũ của trung tõm bao gồm nhiều nguồn khỏc nhau: - Thức ăn thụ xanh: Gồm cỏ Voi và cỏ Ghinờ. Cỏc loại cỏ này ủược trung
tõm mua về giao cho người chăn nuụi trồng. Diện tớch cỏ là khỏ rộng chớnh vỡ vậy mà vào mựa xuõn lượng thức ăn thụ xanh cung cấp cho ủàn bũ là ủầy ủủ.
Ngoài ra, cũn sử dụng cỏc loại cỏ mọc tự nhiờn ủể làm thức ăn như cỏ Gấu. Về mựa ủụng, do thức ăn khan hiếm, thức ăn thụ xanh cho ủàn bũ bao gồm cả thõn cõy chuối và lỏ cõy chuối.
- Thức ăn thụ khụ: Chủ yếu là rơm và bó bia.
- Thức ăn ủ chua: Phần lớn là nhằm mục ủớch khi thức ăn thụ xanh khan
hiếm.
- Thức ăn tinh: Dựng thức ăn cú bỏn trờn thị trường phự hợp với từng lứa tuổi và phự hợp với khả năng khai thỏc của từng giống, từng con cho sữa. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Ngoài ra, cũn bổ sung thờm khoỏng, vitamin, urờ, rỉ mật... dưới dạng hỗ hợp hay bổ sung vào thành phần thức ăn tinh. Ở mỗi ụ chuồng ủều cú ủỏ liếm ủể cho bũ và bờ cú thể liếm tự do.
4.1.3. Tỡnh hỡnh dịch bệnh trờn ủàn bũ qua 4 năm gần ủõy
Bảng 4.2. Tình hình dịch bệnh trên đàn bò của Trung tâm nghiên cứu bò và đồng cỏ Ba Vì (từ 2005 – 8 tháng đầu năm 2008) Bệnh(%) Năm Bệnh viêm vú Bệnh về móng Bệnh đ−ờng sinh dục Bệnh viêm ruột ỉa chảy Bệnh viêm phổi Bệnh khác 2005 20-24 3 5 20-22 7,8 3,8 2006 18-22 2 4 18-21 8,2 3,5 2007 10-15 3 3 17-19 8,1 3,2 8/2008 8-12 2 3 17-21 7,0 3,0
(Số liệu thống kê của Trung tâm)
Qua bảng trờn cho thấy, bệnh viờm vỳ vẫn chiếm tỷ lệ cao nhất trong cỏc bệnh. Nhưng qua cỏc năm thỡ tỷ lệ của bệnh viờm vỳ giảm dần (từ 18-22% vào
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………48
năm 2006 và giảm xuống cũn 8-12% vào năm 2008). Chứng tỏ, con vật ủó thớch nghi dần với ủiều kiện khớ hậu núng ẩm nước ta.
Bệnh viờm phổi qua cỏc năm là khụng biến ủổi nhiều và chủ yếu mắc trờn bờ do sức ủề khỏng của cơ thể cũn kộm. Mặt khỏc, chỳng ủược tỏch khỏi mẹ sớm ủể thuận tiện cho việc vắt sữa.
Tuy nhiờn, trong xu thế hiện nay thỡ cỏc bệnh thường ghộp với nhau làm quỏ trỡnh chẩn ủoỏn bệnh trở nờn khú khăn. Bệnh ghộp thường biểu hiện rất ủa dạng làm con bệnh nặng hơn.
4.2. TèNH HèNH BỆNH VIấM PHỔI ỞðÀN Bấ CỦA TRUNG TÂM NGHIấN CỨU
Bề VÀ ðỒNG CỎ BA Vè – HÀ NỘI.
Qua thống kờ của trại và trực tiếp theo dừi, ủiều tra chỳng tụi thu thập