3. NỘI DUNG – NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.2Môi trường sử dụng nuôi cấy vi khuẩn Môi tr ường Hottinger:
Chế tạo: Cứ 1kg thịt bò xay cho 0,13 kg tụy lợn và 10 lít nước cất, tiến hành tiêu hóa ở 50°C, dùng NaOH 2N chỉnh pH từ 7,8 – 8,0. Qúa trình tiêu hóa ñể giải phóng ra các axit amin khoảng 5 – 5,5 giờ, có khuấy ñảo liên tục.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 39
Dùng HCL 36% ñể hạ pH nồi tiêu hóa xuống 4. ðun sôi, duy trì nhiệt ñộ sôi 20 phút, làm nguội nồi tiêu hóa ñể lắng cặn. Lọc qua giấy lọc Glass prefilter (ñường kính 2µ) ta thu ñược môi trường gốc ( môi trường Hottinger). ðể bảo quản Hottinger ñóng bình hấp tiệt trùng ở 121°C trong 30 phút.
Pepton dạ dày:
Chế tạo: Cứ 3,5 kg dạ dày xay ñem trộn ñều với 10 lít nước cất nóng ñể ñạt nhiệt ñộ cuối cùng là 50 - 52°C. ðưa sang phòng ấm hoặc tủ ấm 50°C, dùng HCL 36% ñể chỉnh pH ñạt 1,8 - 2,5. Dùng máy khuấy, cứ 30 phút lại khuấy 1 lần, tiêu hóa ñược 22 giờ thì lấy ra, ñun sôi. Lọc qua giấy lọc Glass prefilter (ñường kính 2µ) ñể thu lấy phần nước trong chính là nước pepton dạ dày. Hấp tiệt trùng ở 121°C trong 30 phút ñể bảo quản.
Nước gan tiêu hóa:
Chế tạo:- Gan xay: 3 kg - Dạ dày xay: 2 kg - Nước cất: 12 lít
Trộn ñều gan, dạ với nước nóng ñể ñạt nhiệt ñộ cuối cùng là 50 - 52°C. ðưa sang phòng ấm hoặc tủ ấm 50°C ,dùng HCL 36% ñể chỉnh pH ñạt 1,8- 2,0. Dùng máy khuấy, cứ 30 phút lại khuấy 1 lần, tiêu hóa ñược 22 giờ thì hút lấy phần nước bên trên cho lọc qua giấy lọc Glass prefilter (ñường kính 2µ) ñể thu lấy phần nước trong chính là nước gan tiêu hóa. Hấp tiệt trùng ở 121°C trong 30 phút ñể bảo quản.
Pepton bột, ðường Glucoza, Muối NaCl, NaOH 2N, HCL 36%.
Môi trường kiểm tra gồm: nước thịt ống, nước thịt lọ 50ml, thạch máu, thạch huyết thanh, thạch thường, thạch nấm, môi trường yếm khí.
3.4.3 Chất bổ trợ :
Là keo phèn (gel Alumin hydroxit)có công thức rút gọn: xAl(OH)3 yH2O zAl 3++ 3/2 z SO42-
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 40
Pha chế keo phèn: Cho phèn chua ( là muối kép Al2(S04)3 K2S04.24H2O) và nước cất vào thùng Inox, sục hơi nước cho phèn tan ra, ñể khoảng một ngày cho phèn kết tinh, các tạp chất sẽ lắng xuống, lấy phần nước trong. Dùng amoniac hàm lượng 8,5% pha với nước phèn, khi cho nước phèn tác dụng với Amoniac sẽ có phản ứng:
Al2(SO4)3 + 6NH4OH = 3(NH4)2SO4 + 2Al(OH)3 ↓
Khi pha dùng Moteur 1Kw, khuấy 30 - 40 vòng/ phút, pH cuối cùng 7,8 – 8,0. Sau khi pha xong, ñể lắng ít nhất 7-12 giờ ñể các hạt keo Al(OH)3 hình thành to ra. Hút ra các túi vải kaki, rửa 8 – 10 lần cho sạch sunfat.
Tiêu chuẩn hóa nghiệm keo phèn:
- Trắng, xốp, mịn. - Sức hút : 1/2000
- Hàm lượng Al2O3 = 2,5 % - SunFat ≤ 0.2 %