4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.1. Nhân giống sản xuất (Working seed)
Giống gốc ñưa vào sản xuất là vi khuẩn tụ huyết trùng lợn cường ñộc
Pasteurella multocida chủng FgHC, ñược bảo quản trong ống ñông khô ở nhiệt ñộ 2 – 80C. Mỗi lô sản xuất Ban giống của Xí nghiệp thuốc thú y mở một ống ñông khô, cấy trên thạch máu cừu, chọn khuẩn lạc có dung quang Fg và kích thước ñiển hình. ðồng thời kiểm tra ñộc lực qua thỏ ( tiêm 2 vi khuẩn cho thỏ 1,5-2kg, theo dõi trong 3 ngày thỏ chết với bệnh tích tụ máu, xuất huyết ở các tổ chức liên kết dưới da, niêm mạc , phủ tạng). Như vậy, là giống gốc ñạt tiêu chuẩn ñể cấp cho sản xuất.
Sáu ống giống gốc sau khi nhận về từ Ban giống ñược phết kính nhuộm gram ñể kiểm tra hình thái, kích thước và tính chất bắt màu của vi khuẩn. ðồng thời cũng ria cấy trên thạch ñĩa kiểm tra dung quang, kích thước khuẩn lạc như ñã trình bày ở mục 3.5.1.3.
Chúng tôi dùng que cấy bạch kim lấy khuẩn lạc giống THT ñạt yêu cầu ñể nuôi cấy trên môi trường tăng sinh (6 bình tam giác, mỗi bình có
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 49
dung tích 600ml môi trường ñã hấp tiệt trùng) và ñược nuôi dưỡng ở ñiều kiện 370C/ 6 giờ/ dàn lắc ñể nhân giống sản xuất. Khuẩn lạc của
Pasteurella multocida dính, nhầy.
Sau ñó tiến hành kiểm tra thuần khiết canh trùng giống vi khuẩn P. multocida trên các môi trường cơ bản là 2 ống thạch máu, 2 ống thạch thường, 2 ống nước thịt, 2 ống yếm khí và 2 ống thạch nấm. Các môi trường kiểm tra này ñược ñưa vào tủ ấm 370C và ñọc kết quả sau 18 – 48 giờ, riêng thạch nấm ñể ở nhiệt ñộ phòng.
Chúng tôi ñọc kết quả kiểm tra thuần khiết trên các môi trường sau 18- 24 giờ thấy:
+ Ở trên các ống thạch chỉ có một loại khuẩn lạc duy nhất:
- Trên ống thạch máu: Khuẩn lạc mọc nhẵn, rìa gọn, không làm dung huyết.
- Trên ống thạch thường: Khuẩn lạc nhẵn, bóng, màu trắng ñục.
+ Trên ống nước thịt: Canh trùng ñục ñều, lắc có hiện tượng vẩn như sương mù rồi lại mất.
+ Trên ống yếm khí: Canh trùng ñục ñều, không sinh hơi. + Trên ống thạch nấm: Không có nấm mọc.
Như vậy là giống ñạt tiêu chuẩn về thuần khiết. Chúng tôi tiến hành tập trung các bình tam giác có chứa giống thuần khiết vào các bình cầu ñể có 1,0– 1,2 lít giống/ bình. Sau ñó tiến hành lấy mẫu ñể ñếm số vi khuẩn như trình bày ở mục 3.5.1.4 và chuyển bình giống vào tủ lạnh dương 2– 40C ñể bảo quản giống (không nên sử dụng những bình giống ñã ñể quá 7 ngày).
Kết quả kiểm tra thuần khiết và ñếm số lượng vi khuẩn THT lợn của 5 lô giống ñược trình bày ở bảng 4.1:
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 50
Bảng 4.1. Kết quả kiểm tra thuần khiết và số lượng vi khuẩn THT lợn của 5 lô giống
Môi trường kiểm tra Lô giống Thạch máu Thạch thường Nước thịt Yếm khí Thạch nấm Số lượng VK tỷ/ml Mật ñộ VK tiêu chuẩn tỷ/ml Lô 1 TK TK TK TK TK 10,42±0,15 Lô 2 TK TK TK TK TK 10,24±0,26 Lô 3 TK TK TK TK TK 10,30 ±0,21 Lô 4 TK TK TK TK TK 10,10 ±0,32 Lô 5 TK TK TK TK TK 10,32 ±0,19 10± 0,5
Kết quả kiểm tra cho thấy cả 5 lô giống ñều ñạt chỉ tiêu về thuần khiết và ñậm ñộ vi khuẩn. Lô giống ñạt số lượng vi khuẩn cao nhất là lô 1: 10,42±0,15 tỷ VK/ml và lô 4 thấp nhất là 10,1±0,32 tỷ VK/ml. Theo tiêu chuẩn của Xí nghiệp thì các lô giống này ñều ñạt ñộ thuần khiết và mật ñộ vi khuẩn ñể ñưa vào sản xuất.
Kiểm tra thuần khiết giống và ñếm số lượng vi khuẩn là khâu bắt buộc không thể bỏ qua trong quy trình sản xuất vacxin. Bởi vì, không làm ñầy ñủ khâu này thì khả năng tạp trùng và không ñạt mật ñộ vi khuẩn khi chuyển sang nuôi cấy sản xuất trên fermentor là rất cao, gây thiệt hại lớn về kinh tế. Bất kỳ lô giống nào có nghi nghờ không ñạt các chỉ tiêu trên ñều bị loại ngay.
4.1.2 Môi trường sản xuất Thành phần môi trường