3.3.3.1. Hoạt tính phân giải xenluloza [33]
Xác ñịnh hoạt tính phân giải xenluloza bằng phương pháp khuyếch tán trên thạch ñĩa.
Nguyên tắc của phương pháp: enzym xenluloza thuỷ phân CMC trong môi trường sẽ tạo vòng thuỷ phân có màu vàng xung quanh lỗ ñục ñã ñược nhỏ dịch vi sinh vật và hiện màu bằng dung dịch lugol. Dựa vào hệ số giữa
ñường kính vòng thuỷ phân (D) và ñường kính ñục lỗ (d) người ta xác ñịnh
ñược hoạt tính CMC- aza của vi sinh vật.
Phương pháp ñược tiến hành cụ thể như sau:
- Cân 1g CMC, 15g agar trong 1000ml nước cất và khử trùng. - ðổ dịch lỏng vào hộp petri có chiều dày là 1,5cm.
- Dùng dụng cụ ñục một lỗ tròn (ñường kính 10mm) vào giữa hộp petri chứa môi trường CMC.
- Nhỏ 0,1ml dịch enzym ñã ly tâm vào lỗñược ñục. Sau ñó, chờ dịch khô, chuyển các hộp petri vào tủ lạnh (từ 6-8 giờ) ñể enzym khuyếch tán. Chuyển vào tủấm ở nhiệt ñộ 370C ñể enzym tác dụng với cơ chất CMC.
- Cho vào mỗi hộp petri 5ml dịch lugol (Cân 2g KI và 1g I2 vào 300ml nước cất), tráng ñều lên mặt thạch và chờ khoảng 15 phút. Sau ñó, gạt bỏ hết dịch lugol, quan sát vòng khuyếch tán.
- Dùng thước kẻ, ño vòng CMC bị phân giải xung quang lỗ (vùng màu vàng trên nền ñen tím).
- Hoạt tính CMC- aza ñược hiển thị bằng hiệu số giữa ñường kính vòng phân giải (D) và ñường kính lỗ khoan (d), (D- d) ñơn vịño là mm.
3.3.3.2. Phương pháp xác ñịnh hoạt tính phân giải tinh bột [11]
Xác ñịnh hoạt tính phân giải tinh bột bằng phương pháp khuyếch tán trên thạch ñĩa, cá bước tiến hành tương tự theo phương pháp (3.3.3), thay
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………38
CMC bằng tinh bột tan.
3.3.3.3.. Phương pháp xác ñịnh hoạt ñộ proteinaza với cơ chất cazein [20] Xác ñịnh hoạt tính phân giải protein bằng phương pháp khuyếch tán trên thạch ñĩa, cá bước tiến hành tương tự theo phương pháp (3.3.3), thay CMC bằng cazein.
3.3.3.4. Phương pháp xác ñịnh khả năng phân giải photphat hữu cơ [11] Khả năng phân giải photphat khó tan ñược xác ñịnh bằng phương pháp
ño vòng phân giải lexitin trên môi trường Piko ñó là vòng tròn trong suốt bao quanh khuẩn lạc (ñối với trường hợp cấy ñiểm) hoặc lỗ thạch (ñối với trường hợp khoan lỗ thạch – phương pháp khuấch tán trên thạch ñĩa), nơi mà vi sinh vật phân giải lexitin.