Xõy dựng cõy phỏt sinh loài [48,55]
4.1. Nghiờn cứu dịch tễ phõn tử virus VNN Bở Việt Nam 1 Phõn lập và định loại virus VNNB ở Việt Nam
Bảng 4.1. Phõn lập và định loại virus VNNB ở Việt Nam, 2004 - 2007
Số chủng virus VNNB Khu vực Thời gian Phõn lập từ bệnh nhõn Phõn lập từ muỗi Phõn lập từ lợn Tổng số Miền Bắc 2004-2007 08 28 3 39 Miền Trung 2004 01 0 0 01 Miền Nam 2005-2007 0 7 3 10 Tõy Nguyờn 2004-2007 0 17 2 19 Tổng số 9 52 8 69
Sử dụng tế bào Aedes albopictus dũng C6/36 để phõn lập virus và kỹ
thuật ELISA Sandwich để định loại virus VNNB. Kết quả, trong cỏc năm 2004 – 2007, những phõn lập dương tớnh chủ yếu là từ bệnh nhõn ở miền Bắc, miền Trung; trong nghiờn cứu này, chưa phõn lập được virus VNNB từ
dịch nóo tuỷ của bệnh nhõn ở miền Nam và Tõy Nguyờn. Tuy nhiờn, từ mẫu dịch nóo tuỷ của bệnh nhõn ở Gia Lai, Tõy Nguyờn thu thập trong năm 2005
đó phõn lập được chủng virus Banna, một virus thuộc họ Reoviridae. Nhưng từ cỏc mẫu muỗi thu thập ở bốn miền Bắc, Trung, Nam và Tõy Nguyờn, đó phõn lập được một số chủng virus VNNB tương ứng với số chủng virus là 28, 0, 7 và 17; cũn từ mỏu lợn, virus VNNB được phõn lập từ mẫu mỏu lợn
thu thập ở miền Bắc, miền Nam và Tõy Nguyờn tương ứng với số chủng virus VNNB là 3, 3 và 2 chủng. Từ năm 2004 đến 2007 tại cỏc điểm nghiờn cứu đó phõn lập được 69 chủng virus VNNB bao gồm cú 9 chủng phõn lập từ bệnh nhõn ở miền Bắc, miền Trung; cú 52 chủng virus VNNB phõn lập từ
muỗi ở miền Bắc, miền Nam và Tõy Nguyờn; cú 8 chủng virus VNNB phõn lập từ mỏu lợn ở miền Bắc, miền Nam và Tõy Nguyờn. Do vậy, cú một số
chủng virus VNNB phõn lập từ muỗi và mỏu lợn trong cỏc năm 2001 – 2003
ở miền Bắc, miền Trung được lựa chọn bổ sung thờm cho nghiờn cứu để xỏc
định sự xuất hiện virus VNNB genotyp 1 theo thời gian ở Việt Nam.
Cỏc mẫu virus được xỏc định dương tớnh bằng kỹ thuật ELISA Sandwich được lưu giữ để tỏch chiết ARN cho kỹ thuật RT-PCR, tổng hợp sản phẩm ADN cho kỹ thuật giải trỡnh tự gen.
Ghi chỳ giếng thạch: (1) 1 Kb, (2) Chứng (+), (3) Chứng (-), (4) 04VN18, (5): 04VN70, (6): 04VN25, (7): 04VN32, (8): 04VN75, (9): 04VN76, (10): 04VN79, (11): Chứng (-)
Hỡnh 4.1. Kết quả khuếch đại vựng gen E của một số chủng virus VNNB
2000bp
Ghi chỳ giếng thạch: 1: 1 Kb 2: 04VN32 3: 04VN75 4: 04VN76 5: 04VN79 6: 04VN25
Hỡnh 4.2. Kiểm tra sản phẩm PCR tinh sạch trờn thạch agarose
4.1.2. Kết quả xỏc định genotyp virus VNNB trong cỏc năm 1988 – 2007 để nghiờn cứu dịch tễ phõn tử virus VNNB ở Việt Nam