2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.5.3 Kĩ thuật ñ iện di
Kĩ thuật ñiện di trên thạch agarose là hết sức quan trọng ñối với người làm kĩ thuật di truyền và sinh học phân tử, ñó là cách chủ yếu làm cho các ñoạn axit nucleic hiển thị trực tiếp. Phương pháp này dựa trên một ñặc tính là các phân tử axit nucleic ở pH trung tính chúng tích ñiện âm nhờ các nhóm phosphat nằm trên khung photphodieste của các sợi axit nucleic. Khi ñặt chúng vào một ñiện trường, các phân tử axit nucleic sẽ chuyển dịch về cực dương. Khi tiến hành trên môi trường thạch agarose hay các loại thạch ñặc biệt khác, các phân tử axit nucleic tuỳ theo kích thước sẽ dịch chuyển với các tốc ñộ khác nhau. Loại có phân tử lượng lớn dịch chuyển chậm, loại bé hơn sẽ dịch chuyển nhanh hơn [10].
Có hai loại thạch agarose ñược sử dụng phổ biến trong kĩ thuật ñiện di ñó là thạch agarose và thạch polyacrylamid. Thạch agarose ñược dùng ñể thực hiện ñiện
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………24
di trong máy ñiện di, gel polyacrylamid thường ñược dùng ñể phân tách các phân tử axit nucleic có kích thước nhỏ trong các ứng dụng như xác ñịnh trình tự DNA.
ðiện di ñược thực hiện bằng cách ñưa các mẫu axit nucleic có trộn chỉ thị màu xanh Bromphenol vào các lỗ giếng của bản thạch và ñặt một ñiện áp vào ñó. Các axit nucleic ở trên thạch thường hiển thị khi nhuộm bằng Ethidium Bromide và ñược quan sát dưới ánh sáng tử ngoại. Các axit nucleic hiện lên ở dạng băng màu trắng, có thể chụp ảnh và ghi nhận lại ñược. Kích thước các băng DNA ñược so sánh với chỉ thị di truyền (DNA marker). DNA marker thường ñược dùng nhất là DNA của thực khuẩn thể Lamda, có chiều dài 43 kb, ñược cắt bằng enzym giới hạn
HindIII, tạo 8 phân ñoạn với các chiều dài bao gồm 23,1 kb; 9,4 kb; 6,5 kb; 4,3 kb; 2,3 kb; 2,0 kb; 0,564 kb; 0,125 kb. Nhờ chỉ thị di truyền này mà có thể xác ñịnh ñược ñộ dài của ñoạn axit nucleic cần phân tích [10].