vă nuôi cấy theo phương phâp chìm).
- Cồn 96%.
- Câc dụng cụ để nghiền chế phẩm thô, lọc. - Tủ lạnh.
- Đũa, thuỷ tinh, cốc thuỷ tinh, phễu lọc. - Lò sấy.
3.3 Câch tiến hănh:
1. Để kết tủa enzyme, người ta có thể dùng câc loại dung môi như cồn, aceton, muối trung tính (như ammonium sulpate),....Trong thí nghiệm năy, ta dùng cồn như 1 tâc nhđn tạo tủa vì cồn dễ kiếm vă cũng cho kết quả rất tốt. Cồn
được giữ trong tủ lạnh 40C trước khi lăm kết tủa enzyme.
2. Chế phẩm enzyme thô từ canh trường nuôi cấy theo phương phâp bề
mặt được nghiền mịn trong mây nghiền bi. Nếu không có mây nghiền bi người ta có thể giê bằng cối, chăy sứ với sự trợ giúp của cât thạch anh hoặc bột thuỷ
tinh. Cât thạch anh hoặc bột thuỷ tinh được rửa sạch vă sấy thật khô trước khi sử
dụng, cho văo giê cùng với canh trường nuôi cấy bề mặt. Cât hay bột thuỷ tinh lăm tăng khả năng phâ vở tế băo của vi sinh vật mă không lăm thay đổi bản chất enzyme nín thường sử dụng trong câc thí nghiệm thu nhận enzyme từ canh trường nấm sợi. Sau khi nghiền canh trường nuôi cấy bề mặt, cho văo đó 1 lượng nước gấp 4-5 lần khối lượng canh trường trín để hoă tan protein - enzyme từ khối canh trường. Tiến hănh lọc vă thu dịch lọc. Bảo quản dịch lọc trong tủ
lạnh 40C.
4. Lấy cồn từ tủ lạnh đổ từ từ văo dịch lọc enzyme đê lăm lạnh, khuấy rất nhẹđể cồn hoă đều với dịch enzyme. Sau đó, để hổn hợp năy văo tủ lạnh. Lượng cồn dùng để kết tủa enzyme thường gấp 2 - 2,5 lần lượng dịch enzyme. Sau 15 - 24 giờ, hỗn hợp sẽ phđn thănh 2 lớp. Đem ly tđm hoặc lọc để thu protein - enzyme dạng tủa. Protein - enzyme dạng tủa năy còn chứa nhiều nướ. Nước
tồn tại trong đó sẽ lăm giảm hoạt tính enzyme. Do đó, cần phải loại nước bằng câch sấy khô ở nhiệt độ < 400C. Không nín sấy ở nhiệt cao hơn lăm như vậy, enzyme rất dễ mất hoạt tính.
3.4. Đânh giâ chất lượng chế phẩm enzyme:
Chế phẩm enzyme bân tinh khiết được xâc định hoạt tính chung vă hoạt tính riíng theo phương phâp xâc định hoạt tính enzyme trình băy ở cuối chương năy.