PHƯƠNG PHÂP NUÔI CẤY CHÌM
2.1. Nguyín tắc
Phương phâp nuôi cấy chìm lă phương phâp vi sinh vật phât triển, sinh sản vă trao đổi chất trong lòng môi trường. Môi trường dùng trong nuôi cấy chìm thường lă môi trường lỏng.
2.2. Nguyín liệu, dụng cụ vă hoâ chất
- Giống vi sinh vật được sử dụng lă vi khuẩn Bacillus sublitis có khả năng sinh tổng hợp enzym protease vă amylase.
- Môi trường nuôi cấy lă môi trường Edwards: M40. - Bình tam giâc 250 ml.
- Câc hoâ chất cần thiết để kiểm tra hoạt tính protease (xem phương phâp xâc định hoạt tính protease ở cuối chương).
2.3. Câch tiến hănh
- Chuẩn bị 50 ml môi trường trong bình tam giâc 250 ml. Đem tiệt trùng ở
1210C trong 30 phút vă để nguội.
- Chuẩn bịống nghiệm có 10 ml nước cất vô khuẩn đê lăm nguội.
- Cho 10 ml nước cất đê vô khuẩn vă lăm nguội năy văo trong ống nghiệm giống. Dùng que thuỷ tinh khuấy nhẹ để câc tế băo vă băo tử Bacillus sublitis hoă lẫn trong nước. Tất cả câc thao tâc năy được thực hiện trong tủ cấy vô trùng.
- Đổ toăn bộ 10 ml dịch trong ống nghiệm năy văo trong bình tam giâc 250 ml có 50 ml môi trường đê khử trùng vă để nguội. Thao tâc năy cũng phải
được thực hiện trong tủ cấy vô trùng.
- Đặt câc bình tam giâc văo mây lắc có tốc độ 160 - 300 rpm. Nuôi ở nhiệt dộ phòng.
- Sau khi nuôi xong, đem ly tđm, thu lấy dịch. Dịch thu được gọi lă chế
phẩm enzym thô.
2.4. Đânh giâ chất lượng chế phẩm enzym
Chế phẩm enzym thô được xâc định hoạt tính enzym chung vă hoạt tính enzym riíng theo những phương phâp xâc định hoạt tính emzym được trình băy ở cuối chương năy.