1.1. Thực hiện quâ trình amôn hoâ prôtit
- Cho văo bình tam giâc có thể tích 100 - 150ml + 3 - 5g thịt
+ 20 - 30ml nước cất
+ Một cục đất nhỏ đê nghiền ra để cung cấp nguồn vi sinh vật.
- Đun nóng bình tam giâc ở nhiệt độ 80 - 900C để diệt câc tế băo sinh dưỡng vă giữ lại những tế băo mang băo tử.
- Để bình văo tủấm ở nhiệt độ 27 - 280C trong 7 ngăy.
- Kẹp một miếng giấy quỳ đỏ trín miệng ống nghiệm để xâc nhận NH3 được giải phóng ra trong quâ trình phđn giải prôtit.
1.2. Xâc định câc đặc trưng của quâ trình
a. Xâc định thănh phần loăi vi sinh vật tham gia:
- Lăm tiíu bản từ dịch phđn giải prôtit sau 2 - 4 ngăy. - Nhuộm Gram hay nhuộm đơn vết bôi.
- Quan sât tiíu bản bằng vật kính dầu (x 100) trín kính hiển vi.
b. Câc phản ứng định tính một số sản phẩm chủ yếu của quâ trình phđn giải prôtit
* Nguyín tắc:
Dựa trín những phản ứng mău, phản ứng kết tủa đặc trưng của câc sản phẩm trong quâ trình phđn giải prôtit với câc hoâ chất khâc nhau để xâc nhận sự
có mặt của chúng trong câc quâ trình năy. * Câch tiến hănh:
- Xâc định sự có mặt của prôtit trong quâ trình amôn hoâ prôtit bằng phản
ứng mău:
+ Cho văo ống nghiệm:
5ml dung dịch lín men thối. 1ml dung dịch NaOH 30% 0,5ml dung dịch CuSO4 1% + Đun nhẹ ống nghiệm cho tới sôi
+ Kết quả: Dung dịch có mău xanh tím nếu trong đó có prôtit. Dung dịch có mău hơi đỏ nếu trong đó có peptôn.
- Phản ứng định tính NH3
Có thể phât hiện NH3 theo câch sau:
• Cho dịch lín men thối văo 1 bình tam giâc.
• Đặt giấy quỳ đê tẩm nước lín miệng bình nhưng không được để giấy quỳ
chạm văo dịch lín men.
• Đậy nút văo miệng bình vă dùng nilon bao ngoăi cho kín phần nút lại. * Kết quả: Nếu có NH3 bay ra thì giấy quỳ đỏ sẽ chuyển thănh mău xanh. ngược lại nếu dung dịch lín men không có NH3 bay ra thì giấy quỳ vẫn giữ
nguyín mău đỏ của nó. - Phản ứng định tính indol:
Indol lă sản phẩm được hình thănh khi vi sinh vật phđn huỷ câc axit amin có vòng benzen (như triptophan).
Có thể phât hiện indol bằng câch sau: Cho văo ống nghiệm:
3 - 4 ml dịch lín men sau 24 - 48h. Nhỏ văi giọt thuốc thử Ehrlich văo.
* Kết quả: Dung dịch tạo thănh có mău đỏ của Rosindol do sự có mặt của indol trong dịch lín men.
+ Câch 2:
Cho văo ống nghiệm: 5ml dịch lín men
0,5ml H2SO4 10%
Lắc kỹ rồi cho thím:
0,5ml KNO2 0,01%
* Kết quả: Mău đỏ của Nitritindol được tạo thănh do trong dịch lín men có mặt indol.
- Phản ứng định tính H2S:
H2S được hình thănh khi vi sinh vật phđn prôtit có chứa lưu huỳnh. Có thể thử khả năng tạo H2S bằng 1 trong câc câch sau:
Cho văo ống nghiệm hay bình tam giâc dịch lín men.
Kẹp văo miệng bình (hay miệng ống nghiệm) 1 tờ giấy lộc tẩm axítat chì).
Kết quả: Giấy lọc chuyển sang mău đen do trong dịch lín men có mặt H2S.
+ Câch 2:
Đổ văo ống nghiệm môi truờng thạch chì (môi trường thạch có 0,1% axítat chì) vă đểở dạng ống thạch đứng.
Dùng que cấy nhọn lấy sinh khối vi khuẩn amôn hoâ prôtit vă cấy trích sđu văo môi trường thạch từ 2 - 3 đường cấy.
Nuôi câc vi khuẩn năy ở nhiệt độ thích hợp trong 20 - 41h. Sau đó lấy ống nghiệm ra quan sât:
Nếu câc đường cấy có mău đen chứng tỏ có H2S sinh ra trong môi trường.
Nếu câc đường cấy có mău không thay đổi chứng tỏ không có H2S sinh ra trong môi trường.
BĂI 8 : PHƯƠNG PHÂP XÂC ĐỊNH KHẢ NĂNG TẠO SẢN PHẨM BẬC HAI Ở VI SINH VẬT PHẨM BẬC HAI Ở VI SINH VẬT