Việc áp dụng các thành tựu khoa học kỹ thuật hiện đại đã trở lên cần thiết và hữu hiệu trong việc chẩn đoán các bệnh nguy hiểm trên cây trồng. Một trong những ph−ơng pháp hiệu quả, chính xác đ−ợc áp dụng phổ biến trên thế giới là ph−ơng pháp Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Ngày nay, nhiều dạng khác nhau của ELISA đang đ−ợc sử dụng th−ờng xuyên [44, 51, 57]. Trong điều kiện Việt Nam hiện nay, ph−ơng pháp ELISA đặc biệt có ý nghĩa trong chẩn đoán bệnh hại cây trồng do vi sinh vật gây ra.
Năm 1969, khi Arrameas liên kết một kháng thể IgG với một Enzyme và chứng minh rằng, kháng thể liên kết Enzyme này vừa duy trì tính đặc hiệu miễn dịch của kháng thể vừa duy trì tính hoạt động của Enzyme.
Năm 1977, Clarck và Adams lần đầu tiên ứng dụng ph−ơng pháp ELISA để chẩn đoán các cây nhiễm bệnh virus thực vật.
Hiện nay, có hai ph−ơng pháp ELISA đang đ−ợc ứng dụng rộng rãi là ph−ơng pháp Double Antibody Sandwich (DAS - ELISA), ph−ơng pháp này gọi là ph−ơng pháp ELISA trực tiếp. Ph−ơng pháp thứ hai là Indirect ELISA gọi là ph−ơng pháp ELISA gián tiếp.
+ Ph−ơngpháp ELISA trực tiếp (DAS - ELISA):
Ph−ơng pháp DAS - ELISA đ−ợc sử dụng d−ới dạng kỹ thuật ELISA kẹp kép kháng thể. DAS - ELISA đ−ợc Clarck và Adam mô tả vào năm 1977, DAS - ELISA trực tiếp sử dụng kháng thể đặc hiệu virus để vừa bẫy virus vừa phát hiện virus đã bẫy đ−ợc (kháng thể liên kết men sẽ tập hợp đặc hiệu với virus đ−ợc bẫy). Kỹ thuật này đ−ợc sử dụng rộng rãi nh−ng có hai nh−ợc điểm:
- Rất đặc hiệu chủng, do vậy khó phát hiện đ−ợc các chủng của cùng một virus nếu chủng này có quan hệ huyết thanh kém. Tính đặc hiệu cao này là do Enzyme khi liên kết với kháng thể đã làm giảm khả năng kết hợp của kháng thể này với các chủng virus có quan hệ huyết thanh không chặt.
- Đòi hỏi phải có từng loại kháng thể liên kết Enzyme khác nhau cho mỗi loại virus [50]
+ Ph−ơng pháp ELISA gián tiếp (Indirect ELISA):
Theo Koenig R. (1981) −u điểm của ph−ơng pháp này là một kháng thể đặc hiệu kháng thể (káng thể liên kết với Enzyme) có thể phát hiện rất nhiều chủng của virus cần kiểm tra đó. Độ nhạy của kháng nguyên cao hơn và có giá trị Optical density (OD) ở các giếng đối chứng (mẫu cây khỏe) thấp hơn. Có đ−ợc −u điểm này là nhờ kháng thể đặc hiệu virus và kháng thể đặc hiệu kháng thể tạo ra từ động vật máu nóng khác loài (Rowhani and Falk, 1995) [60]. Theo L.F Salazar (1990) ph−ơng pháp ELISA nói chung nhạy cảm rất nhiều và cũng cần ít huyết thanh hơn các ph−ơng pháp huyết thanh khác [10] Chúng tôi lựa chọn ph−ơng pháp ELISA gián tiếp để xác định nguyên nhân gây bệnh virus ToMV và PVX trên cây cà chua.