(Thực hiện tại Phòng Sinh học Thực nghiệm, Viện Hoá học các Hợp chất Thiên nhiên, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam)
a/ Nguyên tắc
Xác định hoạt tính kháng ung thư theo phương pháp của Skelan & CS (1990) và Likhiwitayawuid & CS (1993). Phương pháp hiện đang được áp dụng tại Viện nghiên cứu ưng thư Quốc gia của Hoa Kỳ (NCI) và Trường Đại học Dược, Đại học Tổng hợp Illinois, Chicago, Hoa Kỳ.
b/ Phương pháp thực hiện
Các dòng tế bào thử nghiệm:
• Hep-G2 (Heptatocellular carcinoma – ung thư gan). • Lu (Lung cancer – ung thư phổi).
• RD (Rhabdosarcoma - ung thư màng tim ).
Các dòng tế bào ung thư này được cung cấp bởi Viện Vệ Sinh Dịch Tể Trung Ương.
Môi trường nuôi cấy tế bào: DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium)
hoặc MEME (Minimum Essential Medium with Eagle’s salt) có bổ sung L-glutamine, sodium piruvat, NaHCO3, PSF (Penixillin-Streptomycin sulfate-Fungizone), NAA (Non-Essential Amino acids), 10% BCS (Bovine Calf
Serum), Tripsin-EDTA 0.05%, DMSO (Dimethyl Sulfoside), TCA (Trichloro Acetic acid), Tris Base, PBS (Phosphate Buffered Saline), SRB (Sulfo Rhodamine B), acid acetic.
Chất chuẩn chứng dương tính (có khả năng diệt tế bào ung thư): Ellipithine,
Vinblastine hoặc Taxol pha trong DMSO.
Mật độ quang được đo trên máy ELISA ở bước sóng 495-515 nm.
Tính kết quả
Giá trị CS: là khả năng sống sót của tế bào ở nồng độ nào đó của hoạt chất được thử tính theo % so với chất đối chứng. Dựa vào kết quả đo được của chúng tính theo công thức (3.2). % 100 % 0 0 × − − = ngay DMSO ngay mau OD OD OD OD CS (3.2)
40
Các mẫu có biểu hiện hoạt tính (CS < 50%) sẽ được chọn ra để thử nghiệm tiếp để tìm giá trị IC50
Giá trị IC50: dùng giá trị CS của 10 thang nồng độ, dựa vào chương trình Table curve theo thang giá trị logarit của đường cong phát triển tế bào và nồng độ chất thử (3.3) để tính giá trị IC50 . ) ln( 1 x b a y = + (3.3) Trong đó: y - nồng độ chất thử x - giá trị CS (%)
Chương 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. Phân lập curcumin