Mục đích
Xác định hệ dung môi chạy sắc ký cột.
Kiểm tra thành phần, độ tinh khiết các phân đoạn trong sắc ký cột. Nguyên tắc
Dựa trên sự tương tác khác nhau giữa các thành phần trong hỗn hợp với dung môi và pha tĩnh, do mỗi thành phần có độ phân cực khác nhau.
Phương pháp thực hiện Nguyên liệu, dụng cụ, hóa chất
Bảng 3.2 : Nguyên liệu khảo sát dung môi
STT Nguyên liệu Khối lượng
1 2 3 4 5 6
Bột curcuminoid sau 3 lần kết tinh. Methanol
Dicloromethane Cloroform Acetone
Bản mỏng silica gel 60G, Merck
3-5mg 1chai (500 ml) 1chai (500ml) 1chai (500ml) 1chai (500ml) 20x20cm2 Tiến hành Chuẩn bị
- Hoạt hóa bản mỏng silica gel bằng cách sấy 1giờ ở 110oC sau đó để cân bằng trong bình hút ẩm 30 phút.
- Vuốt ống vi quản bằng ngọn lửa đèn cồn, rửa mao quản 2 lần bằng acetone.
Chấm mẫu lên bản mỏng
- Hòa tan một ít mẫu curcuminoid vào chai bi bằng methanol.
- Dùng ống vi quản hút một ít mẫu đã hòa tan trong chai bi chấm lên bản mỏng. Khoảng cách vết chấm cách bờ dưới 1cm, hai bờ hai bên 1.5cm, và khoảng cách giữa các vết chấm cách nhau 1cm. Kích thước của vết chấm càng nhỏ thì khả năng tách càng tốt.
Triển khai bản mỏng
Chuẩn bị bình triển khai: rửa sạch, sấy khô.
Pha hệ dung môi triển khai vào bình lần lượt theo các tỷ lệ xác định. Bão hòa khí quyển trong bình triển khai từ 15-20 phút.
Dùng kẹp cho bản mỏng đã chấm mẫu vào bình, đậy nắp bình lại.
Theo dõi vạch dung môi di chuyển đến cách mép trên của tấm bản mỏng khoảng 1cm thì lấy bản mỏng ra khỏi bình triển khai.
Sấy nhẹ bản mỏng để đuổi hết dung môi.
Phát hiện vết và tính trị số Rf
Phát hiện vết qua màu sắc tự nhiên.
Phát hiện vết dưới đèn UV (254nm/365nm).
Phun thuốc thử H2SO4 10% trong C2H5OH rồi hơ nhẹ trên nhiệt. Tính Rf
y x Rf =
x: là khoảng cách từ điểm chẫm mẫu đến trung tâm của vết sau khi triển khai.
y: khoảng cách từ điểm vết chấm đến mức dung môi sau cùng. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Hình 3.1: Phương pháp tính Rf Nhận xét và đánh giá các vết trên các bản mỏng để chọn dung môi chạy bản mỏng phù hợp. Chọn dung môi để rửa giải cột sắc ký.