a/ Quy trình tổng hợp
Sơđồ 3.3: Quy trình tổng hợp 2-Hydrazinobenzothiazolcurcumin (HBTC)
Sắc ký cột
- Khuấy trộn, hoàn lưu - Nhiệt độ: 60oC
Dung môi:
CH3COOC2H5: H2O Imine hóa
Loại dung môi
Phân lập Rửa, chiết
Cô giảm áp
Kiểm tra - TLC, đo điểm chảy - IR, MS, NMR 2 hydrazinobenzothiazole Curcumin Dung môi: CH3OH Chỉnh về pH~5 (CH3COOH) Khảo sát hoạt tính sinh học < 95% >=95%
30
b/ Phương pháp thực hiện
Hóa chất, dụng cụ, nguyên liệu:
- Curcumin tinh (sản phẩm từ sắc ký cột giai đoạn trước). - 2- Hydrazinobenzothiazole 97%.
(CTPT: C7H7N3S, M =165.22 ) - Acetic acid.
- Sodium acetate.
- Methanol, diclomethane, Ethyl acetate (Chemsol Vina). Tiến hành
- Cân 448.96mg 2-Hydrazinebenzothiazole vào bình cầu rồi hòa tan bằng methanol.
- Điều chỉnh pH của dung dịch trên về pH = 5 bằng CH3COOH, cho tiếp 500 mg Cur tinh vào bình cầu và khuấy trên bếp khuấy từ.
- Thực hiện phản ứng imine hóa trong ở 600C, có khuấy trộn, hoàn lưu liên tục. - Kiểm tra điểm dừng phản ứng bằng TLC với bản mỏng silica gel trong hệ dung môi CH2Cl2: CH3OH (98:2)( v/v) so với hỗn hợp ban đầu của phản ứng. Nhận thấy khi bản mỏng xuất hiện vết lạ phản quang màu tím dưới đèn UV và vết Cur nhạt thì ngưng phản ứng và tiến hành xử lý mẫu.
c/ Xử lí mẫu sau phản ứng
Mục đích: Loại bỏ bớt tạp chất sau phản ứng ra khỏi hỗn hợp. Hóa chất, nguyên liệu
- Ethyl acetate (Chemsol Vina) - Nước cất.
- Hỗn hợp sau phản ứng.
Tiến hành:
- Cô quay chân không để loại dung môi của hỗn hợp sau phản ứng. - Hòa tan hoàn toàn cắn thu được bằng ethylacetate.
- Cho hỗn hợp trên vào phễu chiết từ từ thêm nước cất vào lắc đều.
- Để yên cho dung dịch trên tách ra thành 2 lớp, mở van từ từ loại bỏ lớp dung dịch nước ở phía dưới, giữ lại lớp dung dịch ethylacetate ở phía trên.
- Làm khan dung dịch ethylacetate thu được bằng Na2SO4 khan. - Cô quay giảm áp loại dung môi thu cao sản phẩm thô.
d/ Tinh chế mẫu
Sau khi xử lý mẫu tiến hành sắc ký cột để phân lập HBTC. Sắc ký cột thô
Hóa chất, nguyên liệu: Dicloromethane (Chemsol Vina), Ete dầu (30-60) (Trung Quốc)
Cao sản phẩm thô sau phản ứng tổng hợp HBTC.
Điều kiện sắc ký cột:
- Silica gel 60G (0.063-0.200mm, Merck) được hoạt hoá ở 110oC, 4 giờ trước khi nhồi cột.
- Cột sắc ký: đường kính 3cm, chiều cao silica gel trong cột: 30cm.
- Hệ dung môi triển khai sắc ký cột: dicloromethane:eter dầu (70:30) (v/v)
Điều kiện sắc ký bản mỏng để kiểm tra quá trình sắc ký cột:
- TLC silica gel 60G F254 (Merck) được hoạt hoá ở 110oC, 1 giờ. - Bản mỏng 5cm x10cm, chiều cao triển khai bản mỏng: 8cm. - Hệ dung môi triển khai TLC: CH2Cl2:CH3OH: (98:2) (v/v). - Hiện màu TLC dưới đèn UV (254nm/365nm).
Sắc ký cột tinh
Hóa chất, nguyên liệu: Dicloromethane (Chemsol Vina).
Sản phẩm từ sắc ký cột thô.
Điều kiện sắc ký cột:
- Silica gel 60G, 0.04-0.06mm, Merck được hoạt hoá ở 110oC, 4 giờ trước khi nhồi cột.
- Cột sắc ký: đường kính 2.5cm, chiều cao silica gel trong cột: 30cm. - Hệ dung môi triển khai sắc ký cột: 100%CH2Cl2
Điều kiện sắc ký bản mỏng để kiểm tra quá trình sắc ký cột:
- TLC silica gel 60G F254 (Merck) được hoạt hoá ở 110oC, 1 giờ. - Bản mỏng 5cm x10cm, chiều cao triển khai bản mỏng: 8cm. - Hệ dung môi triển khai TLC: CH2Cl2:CH3OH = 98:2 (v/v). - Hiện màu TLC: dưới đèn UV (254nm/365nm).
32