a/ Quy trình tổng hợp
Sơđồ 3.4: Quy trình tổng hợp 2,4-Diflorophenylhydrazino curcumin (DFPHC)
Sắc ký cột
-Khuấy trộn, hoàn lưu - Nhiệt độ: 60oC
Dung môi:
CH3COOC2H5: H2O Imine hóa
Loại dung môi
Phân lập Rửa, chiết
Cô giảm áp
Kiểm tra - TLC, đo điểm chảy - IR, MS, NMR 2,4-Difluorophenylhydrazine hydrochloride Curcumin Dung môi: CH3OH Chỉnh về pH~5.0 (CH3COONa) Khảo sát hoạt tính sinh học >=95% <95 %
b/ Phương pháp thực hiện
Hóa chất, dụng cụ, nguyên liệu
• Curcumin tinh khiết đã phân lập ở thí nghiệm trên. • 2,4-Difluorophenylhydrazine hydrochlorode 97%
(CTPT: C6H6F2N2.HCl, M =180.59 ) • Sodium acetate (CH3COONa)
• Methanol • Ethylacetate • Natrisulfat khan • Nước cất.
Tiến hành
Cân 500mg Cur tinh và 490.74mg 2,4-Difluorophenylhydrazine hydrochlorode. Cho 2,4-Difluorophenylhydrazine hydrochlorode vào bình cầu 2 cổ rồi hòa tan hoàn toàn bằng CH3OH. Điều chỉnh pH của dung dịch về pH=5 bằng CH3COONa.
Cho tiếp Cur tinh vào bình cầu và đặt trên bếp khuấy từ. Thực hiện phản ứng imine hóa ở 60oC, khuấy trộn liên tục.
Duy trì ổn định các điều kiện phản ứng và kiểm tra liên tục bằng TLC với bản mỏng silica gel trong hệ dung môi triển khai CH2Cl2: CH3OH (98:2)(v/v) cho đến khi vết Cur trong bình phản ứng nhạt đi và xuất hiện vết lạ ngay trên đầu Cur, vết này đậm dần lên cho phản quang màu tím khi cho hiện màu dưới đèn UV thì dừng phản ứng và tiến hành xử lý mẫu.
c/ Xử lý mẫu sau phản ứng
Mục đích: Loại bỏ bớt tạp chất ra khỏi hỗn hợp sau phản ứng Hóa chất, nguyên liệu
- Ethyl acetate (Chemsol Vina) - Nước cất
- Hỗn hợp chất sau phản ứng.
34
d/ Tinh chế sản phẩm
Để làm tinh sản phẩm hay tách sản phẩm DFPHC ra khỏi hỗn hợp sau phản ứng phải tiến hành sắc ký cột thô với pha tĩnh là Al2O3 trung tính, pha động là CH2Cl2: CH3OH: 99:1(v/v) sau đó tăng dần lên đến tỷ lệ CH2Cl2: CH3OH: 70:30 (v/v).
Sắc ký cột thô
Hóa chất, nguyên liệu: Dicloromethane, methanol (Chemsol Vina)
Cao sản phẩm thô sau phản ứng tổng hợp DFPHC
Điều kiện sắc ký cột:
- Aluminium oxide 60, 0.063-0.200 mm, trung tính (Merck) được hoạt hoá ở 110oC, 4 giờ trước khi nhồi cột. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Cột sắc ký: đường kính 3.5cm, chiều cao aluminium oxide trong cột: 16cm. - Hệ dung môi triển khai sắc ký cột: CH2Cl2:CH3OH: 99:1 (v/v) sau đó tăng dần lên CH2Cl2:CH3OH: 70:30
Điều kiện sắc ký bản mỏng để kiểm tra quá trình sắc ký cột
- TLC Aluminium 60G trung tính, F254 (Merck) được hoạt hoá ở 110oC, 1 giờ. - Bản mỏng 5cmx10cm, chiều cao triển khai bản mỏng: 8cm.
- Hệ dung môi triển khai TLC: CH2Cl2:CH3OH (98:2) (v/v). - Hiện màu TLC: đèn UV (254nm/365nm)
Sắc ký cột tinh
Hóa chất, nguyên liệu: Dicloromethane (Chemsol Vina),
Sản phẩm DFPHC từ sắc ký cột thô.
Điều kiện sắc ký cột:
- Silica gel 60G, 0.04-0.06mm, Merck được hoạt hoá ở 110oC, 4 giờ trước khi nhồi cột.
- Cột sắc ký: đường kính 25mm, chiều cao silica gel trong cột: 30cm. - Hệ dung môi triển khai sắc ký cột: 100% dicloromethane.
Điều kiện sắc ký bản mỏng để kiểm tra quá trình sắc ký cột:
– TLC silica gel 60G F254 (Merck) được hoạt hoá ở 110oC, 1 giờ. – Bản mỏng 5cm x10cm, chiều cao triển khai bản mỏng: 8cm. – Hệ dung môi triển khai TLC: CH2Cl2:CH3OH: 95:5 (v/v). – Hiện màu TLC: đèn UV (254nm/365nm).