2.1 Dụng cụ : Quang phổ kế Shimadzu 1601 kết nối với 1 máy tính IBM-PC trong vùng sóng ngắn, một máy in Lexmark. Sắc ký lỏng hiệu năng cao với đầu dò UV (model 481).
2.2 Vật liệu : PAR và MET dùng để thí nghiệm là của hãng Sanofi-DoguPharm. Methanol và H2O (được pha loãng 2 lần) dùng trong HPLC.
- Dung dịch chuẩn để đo quang phổ được điều chế bằng cách pha loãng ở những nồng độ khác nhau để dựng đường chuẩn.
- Dung dịch chuẩn trong HPLC được điều chế với pha động bằng cách thay đổi nồng độ của một trong hai cấu tử trong hỗn hợp và giữ nguyên nồng độ của cấu tử còn lại ở 10µg/ml. Mẫu được lọc trước khi qua đầu dò sắc ký.
2.3 Phân tích viên thuốc
Lượng 20 viên chứa PAR và MET được cân. Lương tương ứng được cân chính xác, cho vào 100ml bình định mức, khuấy trộn với methanol.
2.4 Phương pháp :
2.4.1 Phương pháp phổ đạo hàm tỷ đối
Dung dịch chuẩn của PAR và MET ở nồng độ khoảng 2-30µg/ml được điều chế trong methanol.
Phổ hấp thu của hỗn hợp 2 cấu tử ở những nồng độ khác nhau của PAR thu được trong máy tính. Phổ của hỗn hợp bị chia cắt bởi phổ chuẩn của MET (10µg/ml) trong methanol. Từ phổ tỷ đối của PAR/MET thu được, phổ đạo hàm bậc một với độ
lệch bước sóng hai cấu tử là Δk= 4nm thu nhận được. Trong hỗn hợp 2 cấu tử, chúng ta có thể xác định được lượng PAR bằng cách đo phổ đạo hàm bậc 1 ở bước sóng 243,0nm trong khoảng bước sóng 231,6-270,8nm.
Phương pháp để xác định hàm lượng của MET ở những nồng độ khác nhau khi PAR là không đổi 12,0µg/ml. Cách làm tương tự như trên, dung dịch chứa MET được xác định bằng cách đo ở bước sóng 230,3nm trong phổ đạo hàm tỷ đối bậc 1 với khoảng bước sóng 200,8nm đến 245,5nm.
2.4.2 Sắc ký lỏng hiệu năng cao
Sắc ký sử dụng pha tĩnh LC-18 (250+4,6nm, 5µm) cột nhồi. Hỗn hợp này được tách ra với pha động là methanol-H2O (60 :40) về thể tích. Pha động được pha loãng và trộn đều trước khi sử dụng, được chuyển ra bên ngoài ở tốc độ dòng là 1,0ml/phút. Thể tích tiêm là 50µl). Dung dịch chuẩn được điều chế với pha động bằng cách thay đổi nồng độ của PAR và MET trong khoảng 2-300 và 1,5-375µg/ml.