78312 MAUREPAS CEDE
2.2.5.2 Khảo sát hàm lượng acid tổng sinh ra trong mơi trường cĩ sử dụng rượu trái cây
dụng rượu trái cây
Xác định hàm lượng ethanol bằng phương pháp chuẩn độ
Số lượng ethanol sinh ra khi lên men được xác định bằng phương pháp
đo oxy hố trên cơ sở oxy hố ethanol thành acid acetic và nước bằng hỗn hợp bicromat kali và acid sulfurit.
3 CH3CH2OH + 2K2Cr2O7 +8 H2SO4 =
3CH3COOH + 2Cr(SO4)2 + K2SO4 +11H2O Khi kết thúc quá trình oxy hố rượu, ta chuẩn độ phần bicromat thừa bằng dung dịch muối Morh
K2Cr2O7 + 6FeSO4(NH4)2SO4 + 7 H2SO4=
Cr2(SO4)3 + 3Fe2(SO4)3 +6(NH4)2SO4 + 7H2O + K2SO4 Dựa vào số lượng bicromat đã được dùng để oxy hố mà tính ra nồng độ
rượu. Phương pháp sẽ cho kết quả chính xác hơn cả khi lượng rượu chứa trong dịch thể khoảng 1-2%. Do đĩ khi nồng độ rượu cao hơn, ta cần pha lỗng dịch nuơi cấy, cịn khi nồng độ thấp hơn ta pha lỗng muối Morh và bicromat.
Các bước thực hiện
Trong bình định mức loại 100ml, ta cho 20ml dịch nuơi cấy đã được tách bỏ các tế bào bằng cách để lắng, lọc hoặc li tâm. Bổ sung nước cất cho tới 100ml, khuấy trộn và lấy ra 10ml cho vào bình cầu đáy trịn loại cĩ dung tích 50-75ml. Trong bình nhận cĩ 3 chỗ phình hình cầu, ta rĩt 25ml dung dịch
bicromat và 10ml H2SO4 đặc. Đậy bình cầu bằng nút cao su cĩ gắn với 1 ống dẫn mà đầu cuối của nĩ phải chạm tới đáy của bình nhận. Sau đĩ trong 10- 15phút cất 2/3 dung tích bình. Dung dịch bicromat trong thời gian đĩ sẽ
chuyển từ màu da cam sang màu nâu bẩn.
Đem chất dịch từ bình nhận chuyển vào bình định mức loại 100ml. Tráng bình nhận và ống dẫn bằng nước cất, sau đĩ rĩt nước này vào bình định mức nĩi trên. Sau đĩ thêm nước cất đến vạch mức, khuấy trộn, lấy ra 20ml cho vào 1 bình tam giác loại 250ml, thêm 20ml nước cất và chuẩn độ bằng muối Morh. Đồng thời ta tiến hành chuẩn độ đối chứng để xác định xem cần bao nhiêu muối Morh để chuẩn độ 5ml dung dịch bicromat. Muốn vậy trong bình tam giác ta trộn 5ml bicromat, 2ml acid sunfuric đặc, 30-40ml nước cất, rồi chuẩn độ bằng muối Morh. Vì muối Mohr là hợp chất khơng bền cho nên phải chuẩn độ đối chứng mỗi lần xác định. Kết thúc chuẩn độ bằng cách xác
định 1 giọt mẫu với dung dịch ferrixianid. Muốn vậy dung đũa thủy tinh lấy 1 giọt chất dịch chuẩn độđặt 1 tấm bằng sứ hay bằng gốm trắng và cạnh đĩ nhỏ
1 giọt ferrixianid, khi hồ lẫn 2 giọt nếu thấy cĩ màu xanh đậm hơn nhiều là phản ứng kết thúc. Chuẩn độ 2 lần dung dịch thí nghiệm và dung dịch đối chứng. Lần chuẩn độ đầu dùng để nhận được các kết quả định hướng, do đĩ phản ứng của dịch chuẩn độ với dung dịch ferixianid được tiến hành sau mỗi lần thêm 1ml dung dịch muối Morh.
Số lượng ethanol tính bằng g/10ml dịch nuơi cấy được tính theo cơng thức: ( ).25.50.01
a b a
a :số ml dung dịch muối Morh đã dùng để chuẩn độ mẫu đối chứng b : số ml dung dịch muối Morh đã dùng để chuẩn độ mẫu thí nghiệm 25: Số ml K2Cr2O7
0,01: g ethanol ứng với 1ml K2Cr2O7
Sau khi xác định độ rượu, tiến hành lên men. Tiếp 25% giống ( dịch nhân giống II) vào mơi trường lên men cĩ chứa 20% thể tích rượu trái cây đã xác
định độ rượu, từ đĩ bổ sung rượu trắng cho đủ nồng độ ethanol thích hợp. Theo dõi sự tạo thành acid qua các ngày lên men. Lên men bằng phương pháp sục khí ở nhiệt độ phịng và đo hàm lượng acid sinh ra mỗi ngày cho đến khi hàm lượng này khơng tăng nữa.