78312 MAUREPAS CEDE
2.2.4.3. Phương pháp nuơi cấy bằng thiết bị lên men hồi lưu
Mơ tả thiết bị lên men hồi lưu Thiết bị gồm cĩ 2 phần
Phần trên : là thùng lên men được thiết kế theo phương pháp nhanh với mục đích tạo bề mặt tiếp xúc lớn hơn giữa vi khuẩn acetic với khơng khí để
2 7 7 1 3 8 9 5 4 6
oxy hĩa rượu. Dịch lên men được chuyển từ trên xuống và khơng khí được chuyển từ dưới lên. Phản ứng sinh học được thực hiện trong khối tế bào cố định. Trong thiết bị này dịch lên men được cho thấm dần qua giá thể BC và
được tuần hịan nhiều lần qua thiết bị, khi chảy qua giá thể BC rượu dần dần bị oxy hĩa thành acid acetic.
Phần duới: chứa dịch lên men sau khi đi qua giá thể BC, cĩ lắp thêm bộ
phận sục khí tạo thành vùng oxy hĩa bổ sung như nồi lên men của phương pháp chìm. Ở phần dưới chúng tơi đặt thêm 1 máy bơm để dịch lên men sau khi qua giá thể BC sẽ được bơm trở lại thùng lên men qua 1 ống dẫn từ máy bơm qua thùng lên men, và dịch lên men được cho chảy xuống từ từ, tưới đều lên giá thể nhờ 1 vịi sen. Ngịai ra, chúng tơi lắp thêm 1 ống dẫn dịch lên men xuống trở lại thùng chứa dịch lên men tạo nên sự hồi lưu của thiết bị, và ống dẫn này nối với thiết bị sục khí mục đích cung cấp oxy làm cho quá trình lên men diễn ra nhanh hơn. 10 9 8 7 6 5 4 3 1 2
Hình 2.2: Sơđồ thiết bị lên men hồi lưu
1: Bình chứa dịch lên men. 2: Bình lên men.
3: Ống dẫn dịch lên men đi lên bình lên men.
4: Ống dẫn dịch sau khi lên men xuống bình chứa dịch lên men. 5: Lưới đỡ giá thể mang.
6: Giá thể BC. 7: Máy bơm.
8: Vịi sen phân phối dịch lên men. 9: Máy sục khí.
10: Van để lấy dịch sau khi lênmen.
Thu nhận cellulose vi khuẩn
-Nhân giống I: Cấy giống Acetobacter xilynum dùng sản xuất BC được giữ trên mơi trường thạch nghiêng sang ống nghiệm chứa 5ml mơi trường sản xuất BC (MT19). Tiến hành lên men tĩnh ở nhiệt độ phịng trong 5 ngày.
-Nhân giống II: Giống cấp I được chuyển vào mơi trường nhân giống cấp II (sử dụng 150ml MT15). Lượng giống bổ sung chiếm khoảng 10% thể tích mơi trường nhân giống cấp II.
-Lên men bề mặt để thu BC: Quá trình lên men được tiến hành trong khay nhựa chứa 1000ml MT15 và 10% giống cấp II, để yên ở nhiệt độ phịng. Thời gian thu BC là 1 tuần sau khi cấy giống cấp II vào.
Phương pháp xử lý BC để sử dụng làm chất mang cố định vi khuẩn
Sau 7 ngày nuơi cấy tĩnh
Thu BC
Rữa kỹ BC bằng nước máy
Ngâm và thay nước liên tục trong 2ngày đối với BC thu được từ mơi trường nước dừa già (4 giờ thay nước 1 lần)
Cân trọng lượng tươi của BC
Vớt các miếng BC ra và sấy cho ráo nước
Cân các miếng BC sau khi sấy
So sánh trọng lượng của miếng BC sau khi sấy với trọng lượng của miếng BC trước khi sấy (trọng lượng giảm khoảng 9 lần)
Đem hấp khử trùng miếng BC ( 1210C, 20 phút)
Phương pháp cố định
-Ngâm BC đã xử lý trong dịch nhân giống cấp II trong 24 giờ.
-Xác định mật độ vi khuẩn bám trên BC bằng phương pháp đếm gián tíêp khuẩn lạc trên mơi trường thạch đĩa .
Cho mơi trường định lượng vào thiết bị lên men hồi lưu. Đo hàm lượng acid tổng tạo thành bằng phương pháp chuẩn độ bằng NaOH 0,1N với phenoltalein làm chỉ thị màu. Mỗi lần đo cách nhau 12 giờ, nuơi cấy cho đến khi hàm lượng acid acetic sinh ra bắt đầu giảm.