a) Kết quả tinh sạch qua lọc gel Biogel P-100 sau khi tủa protease bằng muối.
Hình 4.1 : Sắc ký đồ kết quả tinh sạch qua lọc gel Biogel P-100 khi tủa protease bằng muối đối với nấm Aspergillus oryzae.
Kết quả tinh sạch qua lọc gel khi tủa enzyme bằng muối (NH4)2SO4 thu đƣợc 3 peak với thứ tự nhƣ sau :
Peak1 : từ ống số 8 đến ống 11 : 8 ml Peak2 : từ ống số 17 đến ống 19 : 6 ml. Peak3 : từ ống số 25 đến 31 : 14 ml.
Xác định hàm lƣợng protein và hoạt tính protease cho từng peak. Chúng tôi nhận thấy cả ba peak thu đƣợc đều có hoạt tính. Tuy nhiên hoạt tính protease và hàm lƣợng protein của peak 3 cao nhất nên có thể dự đoán peak 3 có chứa protease quan tâm.
b) Kết quả tinh sạch qua lọc gel Biogel P – 100 sau khi tủa protease bằng cồn.
Hình 4.2 : Sắc ký đồ kết quả tinh sạch qua lọc gel Biogel P – 100 khi tủa bằng cồn đối với nấm Aspergillus oryzae.
Kết quả tinh sạch qua lọc gel khi tủa enzyme bằng cồn thu đƣợc 3 peak với thứ tự nhƣ sau:
Peak 1 : từ ống số 7 đến ống 12 : 12 ml Peak 2 : ống 13 và 14 : 4 ml
Peak 3 : ống 19 đến ống 27 : 18 ml.
Xác định hàm lƣợng protein và hoạt tính protease cho từng peak. Chúng tôi nhận thấy cả ba peak thu đƣợc đều có hoạt tính. Tuy nhiên hoạt tính protease và hàm lƣợng protein của peak 3 cao nhất nên có thể dự đoán peak 3 có chứa protease quan tâm.
c) Kết quả tinh sạch protease của Aspergillus oryzae khi tủa protease bằng cồn và muốiqua sắc ký lọc gel.
Bảng 4.15 : Kết quả tinh sạch protease của Aspergillus oryzae qua sắc ký lọc gel.
HT protease (UI/g CP) HL protein (mg/g CP) HTR (UI/mg) Độ tinh sạch Hiệu suất về HT (%) Chế phẩm enzyme thô 29,01 31,2 0,93 1 100 Dịch thu đƣợc sau khi chạy sắc ký qua
Biogel P-100 khi tủa muối
19,293 3 6,43 6,91 66,49
Dịch thu đƣợc sau khi chạy sắc ký qua
Biogel P-100 khi tủa cồn
10,059 1,7 5,9 6,34 34,67
Nhận xét kết quả lọc gel :
Sau quá trình tinh sạch enzyme bằng sắc ký lọc gel, hoạt tính riêng của protease tăng lên đáng kể. Hoạt tính riêng của protease khi tủa bằng muối sau khi qua sắc ký cao hơn khi tủa bằng cồn. Độ tinh sạch của enzyme sau khi qua sắc ký nhƣ sau : + Khi tủa protease bằng muối : Độ tinh sạch gấp 6,91 lần so với chế phẩm enzyme thô ban đầu.
+ Khi tủa protease bằng cồn : Độ tinh sạch gấp 6,34 lần so với chế phẩm enzyme thô ban đầu.