2 Các bƣớc thực hiện
2.3 Khảo sát các chỉ số hóa lý
2.3.1 Cảm quan
Dùng phƣơng pháp cảm quan để nhận xét màu sắc, mùi vị của tinh dầu.
2.3.2 Tỷ trọng
Tỷ trọng của tinh dầu ở 20o
C (d20
20) là tỷ số của khối lƣợng tinh dầu ở 20oC với khối lƣợng của cùng thể tích nƣớc cất cũng ở 20o C. Chuẩn bị: - Nƣớc cất đã đƣa về nhiệt độ 20o C. - Dung dịch thử đã đƣa về 20o C.
- Picnomet đã đƣợc vệ sinh sạch và khô hoàn toàn.
Cách xác định:
- Trƣớc tiên rửa sạch bình tỷ trọng, tráng kỹ lại bằng aceton hoặc ethanol, sấy thật khô, để nguội, cân khối lƣợng của picnomet rỗng (m0).
- Đổ đầy nƣớc cất vào picnomet. Đậy nắp và lau khô phần nƣớc tràn ra từ ống dẫn cân bằng trên nắp của picnomet. Lau khô toàn bộ bên ngoài picnomet.
- Cân khối lƣợng của picnomet và nƣớc cất trên cân phân tích 4 số (m1).
- Đổ đầy mẫu thử tinh dầu vào picnomet sử dụng để cân nƣớc cất đã đƣợc vệ sinh và làm khô. Đậy nắp và lau khô phần mẫu thử tràn ra từ ống dẫn cân bằng trên nắp của picnomet. Lau khô toàn bộ bên ngoài picnomet.
- Cân khối lƣợng của picnomet và mẫu thử tinh dầu trên cân phân tích 4 số (m2). Tỉ trọng của tinh dầu đƣợc xác định theo công thức :
d20 20 = 0 1 0 2 m m m m Trong đó: m0: khối lƣợng tỷ trọng kế rỗng (g) m1: khối lƣợng tỷ trọng kế và nƣớc cất (g) m2: khối lƣợng tỷ trọng kế và tinh dầu (g)
2.3.3 Chỉ số acid (IA)
Chỉ số acid (IA, indice d’acide) là số mg KOH cần thiết để trung hòa các acid tự do có trong 1g tinh dầu.
KOH trung hòa các acid tự do trong tinh dầu theo phản ứng:
RCOOH + KOH RCOOK + H2O
Chuẩn bị:
- Chuẩn bị chất chỉ thị màu: dung dịch phenolphtalein 2 g/l trong ethanol 95%.
Cách xác định:
- Cho khoảng 2g ± 0.05g tinh dầu vào erlen 125 mL, thêm 5 mL ethanol, 1 giọt dung dịch phenolphtalein. Thực hiện việc chuẩn độ bằng cách nhỏ từ từ dung dịch KOH 0.1 N từ microburette vào erlen để trung hòa acid tự do có trong tinh dầu cho đến khi dung dịch vừa xuất hiện màu hồng.
Nếu thể tích KOH sử dụng dƣới 3ml, làm lại thí nghiệm với một lƣợng tinh dầu nhiều hơn.
- Ghi nhận khối lƣợng tinh dầu (mtd) và thể tích dung dịch KOH 0.1 N (VKOH) trong etanol để chuẩn độ. Chỉ số acid đƣợc tính theo công thức:
KOH td
V m IA 5.61 mtd: khối lƣợng tinh dầu (g)
VKOH: thể tích dung dịch KOH (ml)
2.3.4 Chỉ số savon hóa (IS)
Chỉ số savon hóa (IS, indice de saponification) là số mg KOH cần thiết để tác dụng với tất cả các acid tự do và acid kết hợp dƣới dạng ester có trong 1g tinh dầu.
Quá trình savon hóa tinh dầu bao gồm:
KOH trung hòa các acid tự do: KOH + RCOOH RCOOK + H2O và KOH xà phòng hóa các ester: KOH + R1COOR2 R1COOK + R2OH
- Cho khoảng 2 ± 0.05g tinh dầu vào bình cầu cổ nhám 100 mL, thêm 20 mL KOH 0.1 N trong etanol, đun hoàn lƣu trong 2 giờ để savon hóa ester và trung hòa acid tự do có trong mẫu. Để nguội, thêm vài giọt phenolphthaleine.
- Thực hiện việc chuẩn độ bằng cách cho từ từ từng giọt dung dịch HCl 0.1 N từ microburette vào bình cầu để trung hòa lƣợng KOH còn dƣ đến khi dung dịch mất màu hồng. Thực hiện phép đo 3 lần. Ghi nhận khối lƣợng tinh dầu mtd và thể tích V1 dung dịch HCl 0.1 N dùng để chuẩn độ. Thực hiện tƣơng tự với mẫu trắng là 2 ± 0.05g nƣớc cất, ghi nhận thể tích V0 dung dịch HCl 0.1N dùng để chuẩn độ.
- Chỉ số savon hóa đƣợc tính theo công thức: 0 1 28.05 td IS V V m
Trong đó: V0: thể tích dung dịch HCl 0.1N dùng để chuẩn mẫu trắng. V1: thể tích dung dịch HCl 0.1 N dùng để chuẩn mẫu tinh dầu.
2.3.5 Chỉ số ester (IE)
Chỉ số ester (IE, indice d’ester) là số mg KOH cần thiết để trung hòa lƣợng acid phóng thích ra khi thủy giải các ester có trong 1g tinh dầu.
Cách xác định:
Chỉ số ester của tinh dầu là hiệu số giữa chỉ số savon hóa và chỉ số acid. IE = IS – IA
2.4 Khảo sát thành phần hóa học
Thành phần hóa học của tinh dầu đƣợc xác định bằng phƣơng pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS).
Cách xác định đƣợc tiến hành tại Công ty TNHH MTV Khoa học Công nghệ Hoàn Vũ – Trung tâm Phân tích Công nghệ cao Hoàn Vũ, số 112A Lƣơng Thế Vinh – Phƣờng Tân Thới Hòa – Quận Tân Phú – TP. Hồ Chí Minh.
Sắc ký cột đƣợc thực hiện trên cột sắc ký 3 x 40 cm, pha tĩnh silica gel Merck, Germany
Bản mỏng đƣợc dùng là bản nhôm silica gel 60F254 tráng sẵn, kích thƣớc 20 x 20 cm, độ dày lớp hấp phụ 2,2 mm của hãng Merck, Germany.