Giống gốc đƣợc phân lập từ quả thể nấm, dùng kéo và kim khêu bằng thao tác vô trùng cắt một mẩu nhỏ tổ chức ở mũ nấm rồi dùng que cấy đƣa mẩu mô này vào ống nghiệm thạch nghiêng, sau đó nút lại bằng bông vô trùng thật chặt. Theo dõi sự phát triển của các dòng, chọn dòng phát triển nhanh và mạnh nhất, hệ sợi nấm có màu trắng đồng nhất làm giống gốc để nhân truyền giống cấp 1.
* Kết quả làm môi trường thạch nghiêng: quá trình làm môi trƣờng thạch nghiêng theo đúng quy trình kĩ thuật, kiểm tra và theo dõi các ống thạch nghiêng tôi nhận thấy thạch không bị nhiễm nấm lạ và thạch có màu cánh dán. Thạch nghiêng đƣợc bảo quản để nhân giống gốc và giống cấp 1.
* Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống gốc (cm): động thái tăng tƣởng của hệ sợi nấm giống gốc ta theo dõi hàng ngày và 2 ngày đo chiều dài của hệ sợi nấm ăn lan trong ống thạch nghiêng để thấy rõ đƣợc sự sai khác rõ nhất.
Khi mới cấy vào, tổ chức mẩu mô nấm chỉ to bằng hạt gạo, đến ngày thứ 2 theo dõi thấy các sợi nấm có màu trắng nhƣ bông bắt đầu bung ra xung quanh mẩu mô và ăn lan dần.
Theo dõi động thái ăn lan của các dòng giống gốc đã đo cho thấy dòng 3 và dòng 5 có động thái tăng trƣởng mạnh nhất, tất cả các dòng theo dõi cho thấy
không bị nhiễm nấm lạ, phát triển tƣơng đối đồng đều và có màu trắng đồng nhất. Hệ sợi nấm phát triển đồng đều sau 16 ngày ăn lan kín bề mặt thạch trong ống nghiệm.
Qua quá trình theo dõi 5 ống giống gốc tôi thu đƣợc kết quả trong bảng động thái tăng trƣởng sau:
Bảng 1. Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống gốc Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống gốc theo thời gian (cm)
Ngày Dòng 2/2 4/2 6/2 8/2 10/2 12/2 14/2 16/2 1 0.15 1.74 2.38 3.34 4.16 5.15 6.30 7.23 2 0.13 2.08 2.38 3.38 4.26 5.31 6.46 7.40 3 0.12 2.02 2.41 3.35 4.40 5.18 6.53 7.46 4 0.14 2.26 2.29 3.29 4.53 5.15 6.44 7.43 5 0.12 2.28 2.34 3.57 4.40 5.30 6.31 7.66 LSD5% 0.22 0.36 0.22 0.53 0.43 0.25 0.56 0.28 CV% 4.6 4.3 5.0 4.4 5.0 2.6 4.7 2.0
Động thái tăng trƣởng hệ nấm giống gốc
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
2 ngày 4 ngày 6 ngày 8 ngày 10 ngày 12 ngày 14 ngày 16 ngày
Ngày Cm Dòng 1 Dòng 2 Dòng 3 Dòng 4 Dòng 5
Qua bảng 1, hình 1 trên ta nhận thấy động thái tăng trƣởng của hệ sợi nấm giống gốc sau 2 ngày tăng đều từ 0.12 – 0.15 cm . Sau 4 ngày tăng từ 1.74 - 2.28 cm hệ sợi nấm tiếp tục tăng nhanh theo ngày cấy. Dòng 5 có tốc độ tăng trƣởng nhanh nhất sau 16 ngày đạt 7.66 cm.
* Tốc độ ăn lan của các dòng giống gốc (cm): tốc độ ăn lan đƣợc biểu hiện bằng độ dài của hệ sợi nấm. Hệ sợi nấm có tốc độ ăn lan nhanh và mạnh, thời gian sinh trƣởng ngắn, có màu trắng đồng nhất, không bị nhiễm nấm lạ thể hiện sự sinh trƣởng mạnh và là giống tốt.
Dựa vào động thái tăng trƣởng của các dòng ta có thể biết đƣợc tốc độ ăn lan của các dòng, tốc độ ăn lan đƣợc tính bằng cách lấy độ dài hệ sợi nấm của 2 ngày sau trừ đi độ dài hệ sợi nấm ăn lan đƣợc 2 ngày trƣớc đó. Để thấy rõ đƣợc sự ăn lan nhanh của các dòng giống gốc qua các ngày, kết quả đƣợc thể hiện rõ trong bảng tốc độ ăn lan của các dòng giống gốc (bảng 2).
Bảng 2. Tốc độ ăn lan của các dòng giống gốc (cm) Tốc độ ăn lan của các dòng giống gốc sau ….ngày (cm)
Ngày Dòng Sau2- 4 ngày Sau 4 – 6ngày Sau 6 – 8ngày Sau 8 – 10ngày Sau 10 – 12ngày Sau 12 – 14ngày Sau 14 – 16ngày 1 1.50 2.23 1.80 1.45 1.37 2.03 2.06 2 1.53 2.22 1.83 1.45 1.35 2.03 2.06 3 1.58 2.19 1.70 1.36 1.32 2.09 2.27 4 1.56 2.29 1.83 1.34 1.40 2.06 2.01 5 1.45 2.20 1.81 1.42 1.41 2.08 2.19 5%LSD 0.12 0.28 0.17 0.19 0.10 0.40 0.26 CV5% 4.4 4.7 5.0 3.6 3.9 4.4 4.7
0 0.5 1 1.5 2 2.5
sau 2-4 sau 4-6 sau 6-8 sau 8-10 sau 10-12 sau12-14 sau 14-16
Ngày Cm Dòng 1 Dòng 2 Dòng 3 Dòng 4 Dòng 5
Hình 2. Tốc độ ăn lan của các dòng giống gốc (cm)
Dựa vào tốc độ ăn lan của các dòng ta có thể đánh giá đƣợc dòng nào ăn lan nhanh và đồng đều nhất giữa các ngày, từ đó chọn lọc đƣợc dòng khỏe để nhân giống cấp 1. Nhìn vào bảng số liệu gốc và hình 2 cho ta thấy dòng 3 và dòng 5 có tốc độ ăn lan nhanh nhất. Sau 14 ngày đã ăn lan kín bề mặt thạch, các dòng còn lại có tốc độ ăn lan nhƣ nhau sau 14 - 16 ngày lan kín bề mặt thạch.Tốc độ ăn lan của các dòng giữa các ngày không có sự chênh lệch nhiều sau các lần đo chỉ duy nhất có dòng 3 ở lần đo thứ nhất sau 2 - 4 ngày tăng 1.58 cm sau đó giảm và tăng mạnh và tăng mạnh vào sau 12 - 14 ngày là 2.09 cm. dòng 3 có mức độ tăng tƣơng đối đều nhất và tăng mạnh sau 14 - 16 ngày đạt 2.27 cm và các dòng còn lại sau 14 - 16 ngày chỉ tăng từ 2.01 - 2.19 cm. Qua theo dõi tốc độ ăn lan và thời gian sinh trƣởng của 5 dòng nấm, tôi nhận thấy dòng 3 có tốc độ ăn lan, thời gian sinh trƣởng nhanh và mạnh nhất, sự tăng trƣởng của hệ sợi nấm tƣơng đối đều nhau sau 14 ngày, lấy dòng này để nhân truyền giống cấp 1 với tỉ lệ 1/25, dòng 5 cũng có thời gian sinh trƣởng 14 ngày, tuy nhiên tốc độ tăng trƣởng không đồng đều nhau giữa các ngày so với dòng 3. Dòng có tốc độ ăn lan mạnh và đồng đều giữa các ngày cho thấy sức sinh trƣởng tốt là điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của hệ sợi nấm của các cấp giống sau này.
* Thời gian sinh trưởng của các dòng (ngày): tốc độ ăn lan của các dòng giống gốc cũng thể hiện lên thời gian sinh trƣởng của các dòng, dòng nào có tốc độ ăn lan nhanh và mạnh thì có thời gian sinh trƣởng ngắn hơn. Qua theo dõi thời gian sinh trƣởng của 5 dòng tôi nhận thấy, không có hiện tƣợng nhiễm nấm lạ hay hƣ hỏng thạch trong ống nghiệm. Qua theo dõi thí nghiệm về sự phát triển của 5 dòng nấm tôi thu đƣợc kết quả về thời gian sinh trƣởng của 5 dòng nhƣ sau:
Bảng 3. Thời gian sinh trưởng của các dòng giống gốc (ngày)
LN
CT Nhắc lại 1 Nhắc lại 2 Nhắc lại 3
CT 1 16 16 16
CT 2 16 16 16
CT 3 16 16 16
CT 4 16 16 16
CT 5 16 16 16
Qua bảng 3 trên, theo dõi thời gian sinh trƣởng của 5 dòng nấm ta thấy các dòng nấm đều ăn lan hết bề mặt thạch nghiêng là 16 ngày. Dòng 3 và dòng 5 có thời gian sinh trƣởng và khả năng ăn lan mạnh nhất trong 16 ngày là 2.19 - 2.27 cm 3 dòng còn lại có tốc độ phát triển đồng đều nhau sau 16 ngày thì ăn kín bề mặt thạch, các dòng đều phát triển tốt, hệ sợi nấm có màu trắng đồng nhất, lấy các dòng này để làm giống gốc nhân truyền giống cấp 1.
4.2.3. Nhân giống cấp 1
Giống cấp 1 đƣợc nhân lên từ giống gốc đƣợc phân lập từ quả thể nấm. Môi trƣờng giống cấp 1 là môi trƣờng thạch nghiêng PDA đƣợc làm tƣơng tự nhƣ môi trƣờng nhân giống gốc.
* Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống cấp 1 (cm/2ngày): giống cấp 1 đƣợc nhân lên từ giống gốc đƣợc lựa chọn rất kĩ, là dòng có sức sinh trƣởng mạnh, nhân truyền với tỉ lệ 1/25 (tức một ống giống gốc nhân truyền ra 25 ống giống cấp 1).
Theo dõi động thái tăng trƣởng của hệ sợi nấm giống cấp 1, ta đo chiều dài của hệ sợi ăn lan trong ống thạch nghiêng 2 ngày một lần để thấy đƣợc sự ăn lan rõ rệt nhất của hệ sợi.
Từ bảng số liệu theo dõi trong bảng 4 cho thấy hệ sợi nấm giống cấp 1 phát triển tƣơng đối đồng đều, khả năng ăn lan nhanh và mạnh, hệ sợi có màu trắng đồng nhất và không bị nhiễm nấm lạ. Các dòng này đều là các dòng khoẻ dùng để nhân truyền giống cấp 2.
Qua theo dõi thí nghiệm, thu đƣợc kết quả về động thái tăng trƣởng của hệ sợi nấm thể hiện ở bảng sau:
Bảng 4: Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống cấp 1(cm/2ngày) Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống cấp 1 sau…ngày
Ngày Dòng 2 4 6 8 10 12 1 0.14 1.15 2.84 3.15 4.97 7.07 2 0.16 1.15 2.30 3.14 5.46 7.41 3 0.15 1.16 2.88 3.12 5.06 7.82 4 0.13 1.15 3.26 3.11 5.70 6.33 5 0.18 1.15 2.90 3.13 5.50 6.60 LSD5% 0.33 0.44 0.97 0.40 1.24 1.40 CV 4.5 2.1 5.0 3.7 4.4 3.6
Động thái tăng trƣởng hệ sợi nấm giống cấp 1
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Ngày 2 Ngày 4 Ngày 6 Ngày 8 Ngày 10 Ngày 12
Ngày Cm Dòng 1 Dòng 2 Dòng 3 Dòng 4 Dòng 5
Hình 3. Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống cấp 1(cm/2ngày)
Qua hình 3 cho ta thấy động thái tăng trƣởng của hệ sợi nấm giống cấp 1 phát triển tƣơng đối đều nhau khả năng ăn lan nhanh và mạnh có hệ sợi màu trắng tƣơng đối đồng nhất và không bị nhiễm nấm lạ.các dòng này là các dòng khỏe để nhân truyền giống cấp 2, mức độ tăng trƣởng của các sau 2 ngày là đều nhau từ 0.13 - 0.16 cm chỉ riêng dòng 5 có tốc độ tăng trƣởng mạnh hơn 0.02 cm và có sự thay đổi. Sau ngày 4 các dòng vẫn ăn lan đồng đều tiếp tục tăng 0.98 cm sau 6 ngày mức độ tăng trƣởng có sự biến đổi khác nhau ở các dòng tăng từ 2.30 - 3.26 cm.Sau 8 ngày 5 dòng tăng đồng đều từ 3.11 - 3.15 cm sau 8 tăng 0.85 cm ,Sau 10 ngày các dòng có tốc độ ăn lan mạnh và nhanh 4.49 - 5.70 cm .Sau 12 ngày 5 dòng đã ăn lan kín bề mặt thạch. Sau 12 ngày dòng 3 có tốc độ tăng trƣởng đều và nhanh so với các dòng còn lại nhanh và đều nhất.
* Tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm giống cấp 1(cm): tốc độ tăng trƣởng của hệ sợi nấm giống cấp 1 cũng đƣợc đo và tính tƣơng tự nhƣ hệ sợi nấm giống gốc.
Qua bảng theo dõi tốc độ ăn lan và đồ thị của hệ sợi nấm giống cấp 1 nhận thấy rằng, kết quả l sau 2 - 4 ngày đầu hệ sợi phát triển tƣơng đối đều nhau từ 1.10 - 2.20 cm riêng dòng 3 có tốc độ ăn lan nhanh hơn 0.27 cm và sau 10 ngày hệ sợi nấm hầu nhƣ đã ăn lan kín bề mặt thạch nghiêng trong ống nghiệm.
Bảng 5. Tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm giống cấp 1 Tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm giống cấp 1(cm)
Ngày
Dòng Sau 2 – 4 Sau 4 – 6 Sau 6 – 8 Sau 8 – 10
1 1.10 2.03 3.30 5.70
2 1.90 2.60 3.80 3.90
3 2.20 3.10 3.20 4.12
4 1.70 2.10 3.04 4.11
5 1.93 2.56 3.21 5.10
Theo kết quả trong bảng 5 trên, ta thấy rõ hơn tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm trong hình sau:
Tốc độ ăn lan hệ sợi nấm giống gốc cấp 1
0 1 2 3 4 5 6
2-4 ngày 4-6 ngày 6-8 ngày 8-10 ngày
Ngày Cm Dòng 1 Dòng 2 Dòng 3 Dòng 4 Dòng 5
Hình 4 . Tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm giống cấp 1
* Thời gian sinh trưởng của hệ sợi nấm giống cấp 1: thời gian sinh trƣởng của hệ sợi nấm giống cấp 1 đƣợc tính bắt đầu từ ngày cấy truyền đến ngày hệ sợi nấm ăn lan hết bề mặt thạch nghiêng. Qua theo dõi thời gian sinh trƣởng của 5 dòng thu đƣợc kết quả trong bảng sau:
Bảng 6. Thời gian sinh trưởng của hệ sợi nấm giống cấp 1 (ngày)
LN
CT Nhắc lại 1 Nhắc lại 2 Nhắc lại 3
CT 1 10 10 10
CT 2 10 10 10
CT 3 10 10 10
CT 4 10 10 10
CT 5 10 10 10
Qua bảng 6 trên ta nhận thấy rằng thời gian sinh trƣởng của các dòng tƣơng đối đều nhau, chỉ sau 8 - 10 ngày hệ sợi nấm đã ăn lan kín bề mặt thạch, điều này chứng tỏ giống gốc đã chọn để cấy truyền đảm bảo, có sức sinh trƣởng mạnh nên khi nhân truyền sang môi trƣờng tƣơng tự hệ sợi phát triển rất nhanh.
4.2.4. Nhân giống cấp 2
Giống cấp 2 là giống đƣợc nhân truyền từ giống nấm cấp 1 trên môi trƣờng dinh dƣỡng khác hoàn toàn so với môi trƣờng giống cấp 1.
Môi trƣờng giống cấp 2 bao gồm thóc và bột nhẹ theo tỉ lệ 10kg thóc luộc trộn 0.8 – 1.2g bột nhẹ, một chai môi trƣờng giống cấp 2 là 0.3kg thóc luộc, một ống giống cấp 1 nhân truyền sang giống cấp 2 theo tỉ lệ 1/2.
* Kết quả làm môi trường dinh dưỡng giống nấm cấp 2: môi trƣờng dinh dƣỡng này khác hoàn toàn so với môi trƣờng giống cấp 1. Thóc khi luộc hạt thóc chỉ nứt 2/3 và hạt gạo bên trong chín mềm nhƣng không bị nhoét
* Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống cấp 2 (cm): sau khi nhân truyền, sau 1 ngày hệ sợi nấm trên miếng thạch bung sợi màu trắng và bắt đầu ăn lan, sau 2 ngày hệ sợi phát triển lan khắp bề mặt hạt thóc và đã ăn lan dần xuồng bên dƣới, ta bắt đầu đo động thái tăng trƣởng của hệ sợi nấm cấp 2.
Qua bảng số liệu trên cho thấy, động thái ăn lan của hệ sợi cứ sau 2 ngày có sự sai khác rõ rệt, điều này chứng tỏ chất lƣợng giống cấp 1 đã nhân đảm bảo tốt và môi trƣờng dinh dƣỡng giống cấp 2 đạt tiêu chuẩn nên rất thuận lợi cho hệ
sợi nấm phát triển. Hệ sợi nấm cấp 2 phát triển tƣơng đối đều nhau, khả năng ăn lan nhanh và mạnh, có màu trắng đồng nhất, không có hiện tƣợng nhiễm nấm mốc hay môi trƣờng giống cấp 2 bị hỏng.
Qua theo dõi thí nghiệm tôi thu đƣợc kết quả trong bảng 7, ta nhận thấy rằng động thái tăng trƣởng của hệ sợi nấm giống cấp 2 có sự tăng trƣởng nhƣ sau: sau 2 ngày hệ sợi nấm tăng dao động từ 1.14 - 1.21 cm, sau 4 ngày tăng từ 2.17 - 2.21 cm, sau 6 ngày tăng từ 3.20 - 3.46 cm, sau 8 ngày tăng từ 4.27 - 4.61 cm, sau 10 ngày tăng từ 5.22 - 5.60 cm, sau 12 ngày tăng từ 6.30 - 6.60 cm. Sau 12 ngày thì hệ sợi nấm ăn lan xuống tới đáy chai giống cấp 2 .
Bảng 7. Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống cấp 2 (cm/2ngày) Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống cấp 2 sau… ngày
Dòng Ngày chai 2 4 6 8 10 12 1 1 1.17 2.19 3.34 4.27 5.60 6.33 2 1.14 2.17 3.42 4.30 5.43 6.60 2 3 1.19 2.21 3.45 4.52 5.40 6.50 4 1.18 2.18 3.46 4.61 5.38 6.43 3 5 1.21 2.21 3.20 4.34 5.22 6.30 LSD5% 0.49 0.10 0.35 0.45 0.53 0.39 Cv% 2.2 2.5 4.9 5.0 4.8 3.2
Động thái tăng trƣởng hệ sợi nấm giống cấp 2 0 1 2 3 4 5 6 7
2 ngày 4 ngày 6 ngày 8 ngày 10 ngày 12 ngày
Ngày Cm Chai 1 Chai 2 Chai 3 Chai 4 Chai 5
Hình 5. Động thái tăng trưởng của hệ sợi nấm giống cấp 2 (cm/2ngày)
* Tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm giống cấp 2: tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm giống cấp 2 đƣợc thể hiện sau 12 ngày kể từ khi nhân truyền. Theo dõi tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm cấp 2 giúp nhà nhân giống có thể bố trí thời gian hợp lý để chuẩn bị luộc thóc và hấp thóc làm môi trƣờng dinh dƣỡng giống cấp 3.
Qua theo dõi động thái tăng trƣởng ta thấy đƣợc tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm thể hiện trong bảng sau:
Bảng 8. Tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm giống cấp 2 (cm/ ngày)