Giống nấm cấp 2 đƣợc nhân truyền từ giống cấp 1 phải đồng đều bằng môi trƣờng dinh dƣỡng khác môi trƣờng giống cấp 1.
- môi trường này bao gồm: thóc tẻ bảo quản tốt hạt đều (có thời gian lƣu kho từ 6 - 12 tháng, không bị ẩm mốc). Rửa sạch và ngâm thóc trong nƣớc sạch 12h để loại bỏ hạt lép, sau đó vớt ra để ráo nƣớc.
- tiến hành luộc thóc: cho nƣớc ngập bên trên thóc khoảng 5cm, khi bắt đầu sôi dùng đũa đảo đều tay cho hạt thóc nhanh nứt và nứt đều thóc nứt 2/3 hạt, gạo bên trong chín mềm là đƣợc. Đổ thóc ra khay để ráo nƣớc và quạt thật nguội.
Sau đó bổ sung thêm CaCO3 (bột nhẹ) theo tỉ lệ 0.8 – 1.2g/10 kg thóc luộc và trộn đều đảm bảo các hạt thóc tơi đều và không bị dính nát, trộn thấy một lớp bột mịn phủ đều trên hạt thóc luộc là đƣợc.
- tiến hành đóng môi trường cấp 2 vào chai thuỷ tinh: cho thóc đã trộn bột nhẹ vào chai, lƣợng thóc cho vào chai là 2/3 chai (0.3kg thóc luộc), tạo nút cổ chai bằng bông sạch và bịt đầu chai bằng nilone chịu áp suất cao. Môi trƣờng cấp 2 phải đƣợc hấp thanh trùng ngay. Thời gian hấp thanh trùng môi trƣờng này trong vòng 150 phút, áp suất 1.5atm, nhiệt độ 120oC.
Môi trƣờng giống nấm cấp 2 sau khi hấp thanh trùng phải để qua 1 ngày mới tiến hành cấy giống. Vì sau khi thóc luộc chín và hấp thanh trùng, tinh bột trong thóc chuyển hoá thành đƣờng (quá trình này gọi là quá trình Caramen hoá), để qua 1 ngày cho quá trình này ổn định ta mới tiến hành cấy giống. Một ống giống cấp 1 khi nhân truyền sang giống cấp 2 với tỉ lệ 1/2.
* kỹ thuật cấy truyền: giống cấp 1 đạt tiêu chuẩn cấy sang giống nấm cấp 2 là giống có hệ sợi nấm ăn lan đều trên bề mặt thạch, có màu trắng sữa.
Ta dùng que cấy nhẹ nhàng nới lỏng hệ sợi nấm và cắt đôi lớp thạch trong ống nghiệm thành 2 phần đều nhau, gạt miếng thạch sang chai giống cấp 2, lắc nhẹ tay cho miếng thạch ở chính giữa chai. Khi giống cấp 1 đã cấy vào chai, ta hơ nút bông và cổ chai trên ngọn lửa đèn cồn rồi nút chai giống đã đƣợc cấy lại.
* Nuôi sợi giống nấm cấp 2: chuyển các chai giống nấm cấp 2 sang phòng nuôi cấy hoặc để trong tủ giữ ấm ở nhiệt độ 25o
C. Theo dõi hệ sợi nấm ăn lan và loại bỏ những chại bị nhiễm nấm lạ. Trong 3 ngày đầu sau khi cấy giống cần theo dõi chặt chẽ, nếu chai giống nào có hiện tƣợng miếng thạch khô, các sợi nấm không có hiện tƣợng ăn lan, hoặc bị nhiễm nấm mốc xanh thì phải loại ngay.
* Bố trí thí nghiệm: thí nghiệm đƣợc tiến hành trên 5 ống thạch nghiêng giống nấm cấp 1 và 7 chai giống cấp 2.
* Các chỉ tiêu theo dõi:
- Tốc độ ăn lan của hệ sợi nấm (cm/2ngày).
- Thời gian sinh trƣởng: thời gian sinh trƣởng của hệ sợi nấm cấp 2 đƣợc tình từ ngày cấy đến khi hệ sợi nấm ăn lan kín môi trƣờng trong chai giống (ngày).