Giống nấm cấp 3 đƣợc nhân truyền từ giống cấp 2 trên môi trƣờng dinh dƣỡng tƣơng đồng môi trƣờng giống cấp 2 chỉ khác ở môi trƣờng giống cấp 3 chai thuỷ tinh đƣợc thay bằng túi P.E chịu nhiệt.
Quy trình làm môi trƣờng giống cấp 3 tƣơng tự nhƣ môi trƣờng giống cấp 2. Sau khi luộc thóc và trộn bột nhẹ theo tỉ lệ 0.8 – 1.2g/10kg thóc luộc, ta đóng vào các túi P.E chịu nhiệt, mỗi túi 0.5kg thóc luộc, làm cổ túi bằng nút bông và nắp lại bằng nắp nhựa tránh khi hấp làm ƣớt nút bông. Đem hấp thanh trùng trong 150 phút, nhiệt độ 120o
C ở áp suất 1.5atm.
Hấp xong đƣa vào phòng cấy giống để qua một ngày mới cấy, bật đèn UV để khử trùng phòng cấy và các túi môi trƣờng giống cấp 3. Trƣớc khi cấy ta cần dùng tay bóp nhẹ các túi thóc luộc cho hạt thóc tơi ra kích thích khi cấy giống vào hệ sợi nấm sẽ phát triển nhanh hơn.
Giống nấm cấp 2 đạt tiêu chuẩn cấy truyền có hệ sợi nấm ăn lan đều trên bề mặt môi trƣờng hạt thóc và có màu trắng sữa. Từ một chai giống cấp 2 cấy truyền sang giống cấp 3 với tỉ lệ 1/30.
* Kỹ thuật cấy truyền: mở miệng nút bông chai giống cấp 2, hơ qua ngọn lửa đèn cồn, dùng que cấy gạt bỏ lớp thạch còn sót lại và đánh tơi hạt thóc có hệ sợi nấm cấp 2 trong chai giống (chú ý đánh theo hình tròn xoáy từ trái sang phải hoặc từ phải sang trái tránh làm đứt và làm nát sợi nấm nhiều nhất). Mở nút bông túi giống cấp 3, một tay cầm túi môi trƣờng giống cấp 3, một tay cầm chai giống cấp 2 và lắc nhẹ các hạt giống trong chai cấp 2 sang túi cấp 3. Cấy xong hơ nút bông và nút túi giống cấp 3 lại. Tiếp tục cấy các túi giống khác cho tới khi hết chai giống thì lau dọn sạch sẽ Box cấy và que cấy, vì 2 chai giống là 2 hệ sợi khác nhau.
* Nuôi sợi giống nấm cấp 3: cấy xong ta chuyển các túi giống cấp 3 sang phòng nuôi có điều hoà nhiệt độ ở 24 - 26oC. Theo dõi sự phát triển của hệ sợi nấm, phát hiện các túi nhiễm nấm lạ phải lợi bỏ kịp thời.
* Bố trí thí nghiệm: giai đoạn nhân giống cấp 3 (giống thƣơng phẩm) đƣợc tiến hành trên 2 chai giống cấp 2 với tỉ lệ 1/30. Chọn 2 chai giống cấp 2 có hệ sợi nấm ăn lan nhanh, khoẻ mạnh để nhân giống cấp 3.
*Các chỉ tiêu theo dõi:
- Thời gian sinh trƣởng (ngày): thời gian sinh trƣởng đƣợc tính từ ngày cấy đến khi hệ sợi nấm ăn lan hết môi trƣờng thóc luộc trong túi. Theo dõi ngẫu nhiên 10 túi giống cấp 3 từ mỗi dòng nấm cấp 2 nhân sang.
- Tỉ lệ nhiễm bệnh (%): tỉ lệ bệnh đƣợc tính bằng tổng số bịch giống nhiễm trên tổng số bịch giống sản xuất.