Giống gốc đƣợc nhân từ bào tử nấm nuôi cấy thành khuẩn lạc và nhân từ quả thể nấm nuôi cấy thành các dòng, sau đó theo dõi sự phát triển của các dòng. Chọn dòng có khả năng phát triển mạnh nhất làm giống gốc.
* Phƣơng pháp làm môi trƣờng thạch nghiêng và thạch đĩa (môi trƣờng thạch – đƣờng – khoai tây (PDA))
Môi trƣờng thạch nghiêng và thạch đĩa là môi trƣờng giàu dinh dƣỡng đƣợc làm từ nguyên liệu là Đƣờng Glucose, thạch agar, giá đậu xanh, nƣớc vô trùng theo công thức:
- Khoai tây: 200g - Giá đỗ: 200g.
- Đƣờng Glucose - 20g.
- Thạch agar – 20g và 1lít nƣớc vô trùng.
Khoai tây gọt vỏ rửa sạch thái miếng dầy từ 0.3 – 0.5 cm, thêm 1000ml nƣớc vô trùng vào đun sôi trong 20 phút cho khoai tây chín dừ, sau đó cho giá
đỗ vào đun tiếp cho tới khi thấy giá đỗ có hiện tƣợng tóp lại là đƣợc. Dùng vải màn lọc lấy nƣớc luộc khoai tây và giá đỗ, thêm nƣớc vô trùng cho đủ 1000ml sau đó đun sôi lại lần 2, lần này vừa đun vừa lấy đũa khuấy nhẹ tay cho tới khi sôi lại và vớt sạch bọt. Bổ sung thêm đƣờng và thạch Agar theo tỉ lệ, khuấy nhẹ tay cho tan hết tạo thành dung dịch dinh dƣỡng đồng nhất.
Để tạo thạch đĩa ta cho dung dịch dinh dƣỡng vào các đĩa Petri, khi đổ vào đĩa Petri cần chú ý cho dung dịch trải đều trên mặt đĩa, lớp thạch dày từ 3 – 5 mm.
Để tạo thạch nghiêng ta tiến hành đổ dung dịch dinh dƣỡng đồng nhất vào các ống nghiệm có kích thƣớc 1.5 x 20 cm. Dùng phễu có gắn ống cao su để tránh dung dịch dính lên thành ống nghiệm. Dung dịch trong cao 1/4 chiều dài ống nghiệm. Sau khi đổ xong ta làm nút bông nút chặt miệng ống nghiệm, cứ 5 ống ta buộc lại và bịt bằng túi nilone chịu nhiệt sau đó cho vào nồi hấp thanh trùng, dựng cho ống nghiệm đứng và hấp ở nhiệt độ 120o
C, 1.5atm trong 150 phút. Hấp xong đƣa ống nghiệm ra kê lên một thanh gỗ cao 1.5cm để tạo thạch nghiêng. Các ống thạch nghiêng sau khi hấp xong đƣa ra để 5 phút thì thạch đông lại.
Để kiểm tra môi trƣờng PDA nấu có bị nhiễm nấm lạ hay không, ta đƣa các ống nghiệm vào trong tủ ấm điều chỉnh tủ ở nhiệt độ 30 – 37o
C trong 48 – 72 giờ, đƣa ra nếu không thấy có hiện tƣợng nhiễm nấm lạ nấm có màu cánh dán là đạt. Thạch đĩa dùng cấy bào tử nấm khi phân lập giống gốc, thạch nghiêng dùng để nhân giống gốc và giống cấp 1.