QUY TRÌNH THU NHẬN ENZYME TỪ NỘI TẠNG CÁ TRA VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYME
Xác định hoạt tính enzyme 1 X
Xác định hoạt tính enzyme 2 X
Nội tạng cá tươi bảo quản ở nhiệt độ -200C
Xử lý, xay nhỏ đem cân trọng lượng
Lọc Trích ly
Kết tủa
Ly tâm lấy tủa
Chế phẩm enzyme thô
Xác định hoạt tính enzyme 3
THUYẾT MINH QUY TRÌNH:
Nội tạng cá tra: nội tạng cá tra được thu từ nhà máy chế biến thủy sản được bảo quản lạnh đông trước khi đem trích ly để thu nhận enzyme (-20oC). Thời gian bảo quản nội tạng càng ngắn càng tốt để tránh hiện tượng enzyme bị biến tính.
Xử lý: loại bỏ mật ra khỏi nội tạng cá tra.
Xay mẫu: cho nội tạng vào xay ở máy xay thịt. Trong quá trình xay cần giữ lạnh để tránh biến tính enzyme.
Trích ly enzyme: phối trộn nguyên liệu đã xay với dung môi (nước hoặc dung dịch Na2CO3, HCl). Trong quá trình này enzyme trong nội tạng sẽ hòa tan và khuyếch tán vào dung môi.
Tự phân: để thu nhận enzyme nội bào.
Lọc để thu dịch chứa enzyme: mục đích loại bỏ tạp chất không tan có trong dịch enzyme.
Kết tủa: để tinh sạch enzyme, chúng ta bổ sung các dung môi hữu cơ (ethanol) với tỷ lệ thích hợp vào dịch enzyme thô. Khi đó kết tủa sẽ xuất hiện trong hỗn hợp. Quá trình kết tủa cần giữ ở nhiệt độ 200C.
Ly tâm thu nhận protein đã kết tủa: hỗn hợp được ly tâm ở 4oC với vận tốc 3500 vòng/phút trong thời gian 10 phút nhằm mục đích thu nhận phần kết tủa.