1. Xác định chỉ số E.coli
*Môi trờng dinh dỡng:
+ Môi trờng canh thang EC( môi trờng chọn lọc) Tryptose( hoặc một loại caseinhydrolysate): 20g.
Lactoza:5g.
Muối mật N03 ( oxoid,difco ): 1,5g.…
Kalihydro photphat K2HPO4: 4,0g. Kalidihydro photphat KH2PO4:1,5g. NaCl: 5,0g; Nớc cất:1000,0 ml.
Hoà tan các thành phần, đun đến sôi, nếu cần điều chỉnh pH sao cho cuối cùng là 6,8±0,1. Phân phối môi trờng vào ống nghiệm 18ì180 mm, có ống Durham. Thanh trùng bằng nồi hấp ở t0=1210C, trong 15 phút.
+ Môi trờng canh thang lacto- axitboric
- Pepton: 20g axitboric:3,25g.
- Lactoza:5g NaCl:5,0g.
- K2HPO4:12,2g Nớc cất: 1000ml. - KH2PO4: 4,1g
Hòa tan các thành phần, nếu cần thiết đun sôi để hoà tan hoàn toàn. Phân phối vào các ống nghiệm có ống Durham, thanh trùng bằng nồi hấp ở t0=1210C, trong 15 phút.
Đồ án tốt nghiệp
Dùng ống hút vô khuẩn lấy trong mẫu hộp gà ác mỗi ống 1ml mẫu thử, cấy song hành vào hai ống nghiệm có chứa một trong các môi trờng canh thang chọn lọc (44±1)0C trong tủ ấm, trong thời gian 24- 48 giờ.
Sau 24 giờ kiểm tra các mẫu cấy không thấy chuyển màu môi trờng, trong, không sinh hơi kết luận mẫu cấy âm tính. Tiếp tục nuôi trong tủ ấm thêm 24 giờ nữa vẫn không thấy chuyển màu môi trờng, không sinh hơi, trong nh vậy mẫu gà ác khi kiểm tra trực khuẩn E.coli có kết quả âm tính.
Kết quả đợc thể hiện ở bảng 1.
Bảng 1: Kết quả xác định trực khuẩn E.coli trên môi trờng canh thang chọn lọc
Môi trờng Phản ứng đặc trng Kết quả
a. Canh thang chọn lọc EC
b. Canh thang lacto-axitboric
Sinh hơi, làm chuyển màu môi trờng.
Sinh hơi, làm chuyển màu môi trờng.
− −
Ghi chú: Dấu(-) biểu thị phản ứng âm tính, phản ứng không xảy ra.
Kết quả bảng trên cho ta thấy : Trong sản phẩm gà ác tần thuốc bắc đóng hộp không có mặt của trực khuẩn E.coli, chứng tỏ sản phẩm đảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm, có chất lợng tốt.
2. Xác định tổng số vi sinh vật kị khí
* Môi trờng dinh dỡng:
+ Môi trờng Uynxơn-Ble(Wilson Blair, cải tiến).
Cao thịt: 5,0g Glucoza: 20,0g.
Pepton: 10,0g Nớc cất: 1000,0ml.
Đồ án tốt nghiệp (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Đun sôi và để hoà tan hoàn toàn thành phần phân phối vào ống nghiệm 20ì220 mm. Mỗi ống bao gồm 20 ml môi trờng, thanh trùng ở t0=1210C, trong 15 phút, đem đun tan chảy, thêm vào mỗi ống bằng thao tác vô trùng 2,0 ml dung dịch Na2SO3 20% và 5 giọt dung dịch phèn sắt amino 5% (NH4Fe(SO4)2.12H2O).
+ Môi trờng S.P.S ( Sulphite-Polymyxin-Sulphadiazine)
Pepton( từ casein): 15,0g Polymyxin B Sulphate: 0,01g. Cao men : 10,0g Sulphadiazin Natri : 0,12g. Xitrat Sắt(III) : 0,5g Thạch bột(aga-aga):14,0g. Natri sulphite: 0,5g Nớc cất: 1000,0 ml
pH cuối cùng của môi trờng là (7,0±0,1). * Cách tiến hành
Dùng ống hút vô khuẩn lấy trong mẫu hộp gà ác mỗi ống 10 ml mẫu thử, cấy vào hai ống môi trờng wilson-Blair hoặc SPS đã đợc đun tan chảy và để nguội đến 45-500C, lắc tròn ống để trộn đều mẫu trong môi trờng. Đặt ống đã cấy vào đun cách thuỷ ở 800C trong thời gian 10 phút. Lấy ra làm lạnh ngay dới vòi nớc chảy hoặc trong tủ lạnh, khi thạch đông, đa ống mẫu vào nuôi trong tủ ấm 370C trong 24-72 giờ.
Sau 24 giờ kiểm tra các mẫu cấy không thấy các khuẩn lạc màu đen, tròn kết luận mẫu cấy âm tính. Sau 24- 48 giờ tiếp theo vẫn không thấy các khuẩn lạc tròn, màu đen, không có hiện tợng sinh hơi xuất hiện các bọt khí nh vậy mẫu gà ác khi kiểm tra trực khuẩn Clostridium perfringers có kết quả âm tính.
Kết quả đợc trình bày ở bảng 2.
Bảng 2: Kết quả xác định trực khuẩn Clostridium perfingers trên môi trờng Uynxơn-Ble &SPS.
Môi trờng Phản ứng đặc trng Kết quả
a. Uynxơn-Ble Sinh H2S, khuẩn lạc tròn, màu đen
Đồ án tốt nghiệp
b. SPS Sinh H2S, khuẩn lạc tròn, màu đen
−
Ghi chú: Dấu(-) biểu thị phản ứng âm tính, phản ứng không xảy ra.
Kết quả bảng trên cho ta thấy : Trong sản phẩm gà ác tần thuốc bắc đóng hộp không có mặt của trực khuẩn Clostridium perfringers, chứng tỏ sản phẩm đảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm, có chất lợng tốt.