- Thermonuclease cụa S aureus: cũng như tât cạ các vi sinh vaơt khác S aureus đeău có theơ toơng hợp DNAse ngối bào, như có đieơm khác bieơt so với tât cạ các loài vi sinh vaơt khác,
4.PHƯƠNG PHÁP PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tât cạ các DNA polymerase đeău caăn những moăi chuyeđn bieơt đeơ toơng hợp moơt mách DNA mới từ mách khuođn. Mách khuođn thường là những những trình tự DNA cụa gen quy đaịc trưng cho loài vi sinh vaơt múc tieđu hoaịc các gen quy định vieơc toơng hợp moơt lối đoơc tô chuyeđn bieơt. Moăi là những đốn DNA ngaĩn, có khạ naíng baĩt caịp boơ sung với moơt đaău cụa mách khuođn và nhờ hốt đoơng cụa DNA polymerase đốn moăi này được nôi dài đeơ hình thành mách mới. Khi cung câp hai moăi chuyeđn bieơt baĩt caịp boơ sung với hai đaău cụa moơt trình tự DNA, với đieău kieơn DNA polymerase hốt đoơng trong phạn ứng PCR, moơt đốn DNA naỉm giữa hai moăi sẽ được táo neđn. Như vaơy, đeơ khuêch đái moơt trình tự DNA xác định, ta phại có những thođng tin tôi thieơu veă trình tự đó đụ đeơ táo các moăi boơ sung chuyeđn bieơt. Các moăi này goăm moơt moăi xuođi (sens primer) và moơt moăi ngược (antisens primer) so với chieău phieđn mã cụa gen.
Phạn ứng PCR là moơt chuoêi nhieău chu kỳ nôi tiêp nhau. Moêi chu kỳ goăm ba bước: biên tính (denaturation), lai (anealation), toơng hợp (elongation). Phađn tích sạn phaơm khuyêch đái baỉng sự đieơn di tređn gel agarose. Đaịc trưng cụa phạn ứng khuêch đái đôi với từng vi sinh vaơt múc tieđu thođng qua kích thước cụa sạn phaơm khuêch đái.
RNA múc tieđu Mău dò
thu giữ Mău dò phát hieơn Que thử Cơ chât phát quang
http://www.ebook.edu.vn 43
Sơ đoă phạn ứng PCR
Sơđồ phản ứng PCR
Ưu đieơm cụa phương pháp PCR: - Thời gian cho kêt quạ nhanh
- Có theơ nhaơn dieơn những vi sinh vaơt khó nuođi cây. Vieơc nuođi cây taíng sinh là đơn giạn hơn và có khi khođng caăn thiêt.
- Hóa chât caăn cho phạn ứng PCR sẵn có hơn và deê toăn trữ hơn so với trường hợp huyêt thanh hĩc. Khođng caăn dúng cú và mođi trường chaơn đoán phức táp, có theơ thực hieơn ở hieơn trường.
- Ít tôn kém veă maịt nhađn sự. Có theơ được tự đoơng hóa đeơ làm giạm chi phí phát hieơn các vi sinh vaơt gađy beơnh trong thực phaơm.
Maịc dù vaơy phương pháp PCR văn còn moơt sô khuyêt đieơm caăn khaĩc phúc:
- Sự ức chê hốt tính cụa Taq DNA polymerase bởi thành phaăn cụa mău vaơt. Mău thực phaơm thường có những thành phaăn phức táp. Vieơc chiêt tách và tinh chê DNA từ
http://www.ebook.edu.vn 44
thực phaơm baỉng PCR khođng caăn tách chiêt, tinh chê DNA.
- Maơt đoơ vi sinh vaơt gađy beơnh hieơn dieơn trong mău thực phaơm thường thâp, neđn trong đa sô trường hợp caăn có bước nuođi cây làm giàu đeơ có được maơt đoơ đụ đeơ phát hieơn baỉng PCR.
- Phương pháp này khođng phađn bieơt được tê bào sông với tê bào chêt. Do vaơy có theơ dăn đên trường hợp dương tính giạ do DNA từ tê bào chêt. Ngược lái phương pháp này cho phép phát hieơn bào tử, dáng tieăm sinh, hay tê bào đã chêt cụa các vi sinh vaơt gađy beơnh hoaịc gađy ngoơ đoơc.