- CT1: PEG 0% CT2: PEG 10%
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.5. Ảnh hưởng của CoCl2 ựến sự hình thành hoa invitro
Nguyên tố vi lượng chiếm một hàm lượng rất nhỏ trong cây nhưng cây sinh trưởng và phát triển thì khơng thiếu chúng ựược. Vi lượng có vai trị ựiều chỉnh hoạt ựộng sống của cây, hoạt hóa hệ thống Enzym thay ựổi ựặc tắnh lý hóa của nguyên sinh chất, thay ựổi tắnh chống chịu của cây với các ựiều kiện không thuận lợi của môi trường...
Vi lượng AgNo3 và CoCl2 ựược Sharma nghiên cứu và tìm hiểu ảnh hưởng của chúng trên cây Ớt in vitro. Theo những nghiên cứu tác giả chỉ ra các ion coban ựã ức chế sản sinh Ethylen, quá trình này có ảnh hưởng trực tiếp tới quá trình ra hoa ở cây trồng. Chắnh vì những lý do trên chúng tơi tiến hành bố trắ thắ nghiệm với vi lượng này trên cây hoa hồng in vitro.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 59
Bảng 4.8. Ảnh hưởng của CoCl2 ựến các chồi nuôi cấy in vitro của giống Cơm Phú Thọ (sau 60 ngày theo dõi)
CT Nồng ựộ (ộM) Số rễ (Cái) Số chồi (Cái) Cao cây (Cm) Số lá (Cái) đC 0 3,06 0,40 1,60 3,40 CT1 10 1,23 0,20 1,65 3,06 CT2 20 3,16 0,20 1,90 3,43 CT3 30 1,93 0,10 2,06 3,20 CT4 40 1,86 0,10 2,00 3,06 CT5 50 1,46 0,10 1,76 3,06 LSD 5% 0,10 0,33 0,59 0,83 CV% 2,70 0,00 1,80 1,50
Bảng 4.9. Ảnh hưởng của CoCl2 ựến sự hình thành hoa của giống Cơm Phú Thọ (sau 60 ngày theo dõi)
CT Nồng ựộ (ộM)
Tỷ lệ hình thành hoa
(%)
Ngày xuất hiện nụ hoa ựầu tiên
(Sau cấy) Kắch thước hoa (Cm) độ bền hoa (Ngày) Màu sắc hoa đC 0 0 CT1 10 0 CT2 20 0,33 27 1,0 12 đậm CT3 30 6,70 27 0,9 13 Hơi ựậm CT4 40 10,00 25 0,8 11 Hơi nhạt CT5 50 6.70 22 0,8 10 Nhạt
Kết quả thắ nghiệm cho thấy qua bảng 4.8 và bảng 4.9 giống hoa hồng Cơm Phú Thọ ựã có cảm ứng ra hoa khi môi trường nuôi cấy ựược bổ sung CoCl2 sau 27 ngày, mặc dù tỷ lệ cho hoa nở chưa cao (cao nhất là 10% ở công thức 4)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 60 Qua bảng 4.8 cho thấy CoCl2 ựã có ảnh hưởng tới các chỉ tiêu sinh trưởng của giống hồng Cơm Phú Thọ khi chất này ựược bổ sung vào trong môi trường nuôi cấy, thể hiện ở sự phát triển chiều cao cây, cây sinh trường chiều cao trong môi trường có bổ sung CoCl2 nhanh hơn so với ựối chứng nhiều. Số lá và số rễ cũng cao hơn khi hàm lượng CoCl2 ựược bổ sung 20 ộM ở công thức 2. CoCl2 khi bổ sung vào trong môi trường nuôi cấy ựã gây ức chế sự phát sinh chồi mới ở hàm lượng bổ sung càng cao thì sự ức chế phát sinh chồi càng rõ ràng, ở công thức 5 là 0,1% tỷ lệ chồi mới ựược hình thành so với ựối chứng là 0,4% số chồi mới ựược hình thành.
Với nồng ựộ CoCl2 ựược bổ sung ở công thức 2 là 20ộM là thắch hợp nhất cho giống Cơm Phú Thọ phát sinh rễ và cho số lá cao nhất. Với nồng ựộ CoCl2 ựược bổ sung là 40 ộm ở công thức 3 là thắch hợp nhất cho sự phát triển chiều cao cây.
Qua bảng 4.9 ta thấy giống Cơm Phú Thọ cho nụ hoa xuất hiện sớm ở công thức 5 (CoCl2 50ộM), 22 ngày sau cấy nụ hoa ựầu tiên ựã xuất hiện.
Nụ hoa ựược hình thành sớm nhất ở nồng ựộ 50 ộM CoCl2 (sau 22 ngày) tại các nồng ựộ 10, 20, 30 và 40 ộM CoCl2 nụ hoa hình thành muộn hơn sau 3 ựến 5 ngày. Các nụ hoa ựược hình thành có hình dạng bình thường, nhưng có kắch thước nhỏ hơn kắch thước hoa ngoài tự nhiên, khi nở các cánh hoa nhỏ, ựầy ựủ ựài, tràng, nhị, nhụy. Một số nụ hoa ở nồng ựộ 30 ộM, 40 ộM CoCl2 sau khi nụ ựược hình thành ựược 3 ựến 4 ngày có dấu hiệu bị héo cuống, dẫn ựến tiêu biến nụ, khơng nở hoa. Khi hình thành nụ 5-7 ngày hoa bắt ựầu nở, sau khi nở 10-15 ngày hoa bắt ựầu tàn thời gian tồn tại của hoa là tương ựối dài so với hoa ngồi mơi trường ngồi là 3, 4 ngày.
Tỷ lệ hình hành nụ tăng theo tỷ lệ của hàm lượng CoCl2 ựược bổ sung vào trong môi trường, trên cơ sở quan sát và theo thống kê tỷ lệ hình thành nụ cao nhất ở công thức 4 với 21%. đa số các nụ bị tiêu biến và héo trước khi nở, ở công thức 5 với nồng ựộ 50 ộM một số cây sau cấy khoảng 25-30 ngày
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 61 cây bị chết trước khi cây ra hoa (có thể ựây là dấu hiệu biểu hiện ngộ ựộc coban). Tỷ lệ cây cho hoa nở cao nhất của giống Cơm Phú Thọ là ở công thức 4, công thức có hàm lượng coban ựược bổ sung là 40ộM với tỷ lệ hoa nở là 10% (Bảng 4.9). Ở các cơng thức có hàm lượng CoCl2 ựược bổ sung cao (CT4 và CT5) thì kắch thước hoa trung bình ở các cơng thức này bé hơn so với các cơng thức có hàm lượng CoCl2 ựược bổ sung ắt hơn. Thời gian tồn tại của hoa (từ khi hoa nở tới khi hoa tàn) cũng ngắn hơn so với công thức 2 và 3, cơng thức 5 trung bình thời gian tồn tại của hoa là 7-10 ngày cịn ở cơng thức 3 thời gian tồn tại 10-15 ngày (Bảng 4.9). Màu sắc hoa cũng có sự khác nhau giữa các cơng thức, theo quan sát màu sắc hoa nhạt dần và tươi sáng hơn khi hàm lượng CoCl2 ựược bổ sung tăng dần. Ở công thức 5 hoa cho màu sắc nhạt nhất và ựậm nhất ở công thức 2.
Bảng 4.10. Ảnh hưởng của CoCl2 ựến các chồi nuôi cấy in vitro của giống Nhung đà Bắc Hịa Bình (sau 60 ngày theo dõi)
CT Nồng ựộ (ộM) Số rễ (Cái) Số chồi (Cái) Cao cây (Cm) Số lá (Cái) đC 0 2,16 0,35 1,76 4,03 CT1 10 3,56 0,25 2,20 4,56 CT2 20 3,14 0,15 2,36 5,03 CT3 30 3,57 0,10 2,56 5,50 CT4 40 4,13 0,10 2,00 5,10 CT5 50 4,53 0,00 1,86 4,60 LSD 5% 0,84 0,82 0,11 0,59 CV% 1,40 0,00 2,90 0,70
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 62
Bảng 4.11. Ảnh hưởng của CoCl2 ựến sự hình thành hoa của giống Nhung đà Bắc Hịa Bình (sau 60 ngày theo dõi)
CT Nồng Nồng ựộ (ộM) Tỷ lệ hình thành hoa (%)
Ngày xuất hiện nụ hoa ựầu tiên
(Sau cấy) Kắch thước hoa (Cm) độ bền hoa (Ngày) Màu sắc hoa đC 0 0 CT1 10 0 CT2 20 0,33 28 11 12 đậm CT3 30 5,70 28 10 13 Hơi ựậm CT4 40 8,00 26 9 13 Hơi nhạt CT5 50 4,70 23 9 11 Nhạt
Tương tự với giống hoa hồng Cơm Phú Thọ hàm lượng CoCl2 ựược bổ sung vào mơi trường cũng ảnh hưởng tới q trình sinh trưởng và phát triển của giống Nhung đà Bắc Hịa Bình ( bảng 4.10 và 4.11). Cây sinh trưởng nhanh hơn so với ựối chứng và ựã cảm ứng ra hoa mặc dù tỷ lệ chưa cao (thấp hơn với giống Cơm Phú Thọ). Các chỉ tiêu sinh trưởng như số rễ, chiều cao cây ựều cao hơn so với ựối chứng và thể hiện rõ hơn so với giống Cơm Phú Thọ. Giống như hồng Cơm Phú Thọ CoCl2 cũng ức chế phát sinh chồi mới, thể hiện ở nồng ựộ càng cao thì sự phát sinh chồi càng thấp. Tỷ lệ hình thành hoa ở giống Nhung đà Bắc Hịa Bình thấp hơn so với giống Cơm Phú Thọ, nụ hoa ựược hình thành sớm ở cơng thức 5, sự hình thành nụ khá cao các quá trình hình thành nụ rải rác từ ngày thứ 20 ựến ngày thứ 60 từ khi cấy chuyển vào mơi trường có CoCl2.
Cũng có hiện tượng nụ hoa tiêu biến sau khi xuất hiện 2 tới 3 ngày, một số nụ khi nở có những cánh hoa dị dạng không ựều nhau. Thời gian tồn tại hoa 7 - 15 ngày (bảng 4.11), hoa nở với ựầy ựủ tràng, nhị và nhụy. Công thức cho tỷ lệ hoa nở cao nhất là công thức 4, màu sắc hoa sáng hơn và nhạt khi hàm lượng CoCl2 ựược bổ sung tăng dần.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 63 Với công thức 3 CoCl2 30 ộM ựược cho là tối ưu cho các giống, với màu sắc hoa ựẹp hoa nở to và thời gian tồn tại hoa lâu 12 tới 15 ngày.
Kết luận: tỷ lệ % ra hoa cao nhất với hai giống trên ựều ở công thức 4 với nồng ựộ CoCl2 40 ộM. Kết quả này so với nghiên cứu của Trung tâm thực phẩm viện nghiên cứu Mysore Ấn độ ựược ựăng trên tạp chắ công nghệ sinh học ISSN số 2 phát hành năm 2008 trên ựối tượng cây ớt Capsicum frutescens in vitro là thấp hơn và nồng ựộ CoCl2 cho cảm ứng ra hoa ựạt tỷ lệ
cao nhất cũng thấp hơn là CoCl2 30ộM. Thời gian hoa nở cũng thay ựổi theo từng công thức ở các cơng thức có nồng ựộ CoCl2 cao thì cho hoa nở sớm hơn, ựiều này trùng với những gì mà chúng tôi theo dõi trên ựối tượng hoa hồng. Theo nghiên cứu này họ chỉ ra rằng AgN03 ựã ngăn chặn tác ựộng của ethylene, CoCl2 ựã ức chế tổng hợp ethylene, kết quả này trùng hợp với những gì mà Lưu đức Hoa, Yang ựưa ra năm 1976, Bais et at năm 2000, và Obulreddy et at 2001 ựã nghiên cứu và công bố.
Kết luận hai giống: Nhung đà Bắc Hịa Bình và Cơm Phú Thọ cảm ứng ra hoa mạnh khi mơi trường có bổ sung AgN03, chúng cho tỷ lệ hoa cao nhất ở công thức 4 với nồng ựộ AgN03 là 40 ộM, tỷ lệ ra hoa này cũng cao hơn CoCl2 rất nhiều trên cả hai giống ựã bố trắ thắ nghiệm, ựiều này chứng tỏ vi lượng AgN03 gây cảm ứng ra hoa mạnh hơn CoCl2 trên hai giống hoa hồng này.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 64
20 ộM CoCl2 30 ộM CoCl2
40 ộM CoCl2 50 ộM CoCl2
đC. 0ộM CoCl2
Hình 4.3. Ảnh hưởng của CoCl2 ựến sự hình thành hoa của giống Cơm Phú Thọ (sau 60 ngày theo dõi)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 65
20 ộM CoCl2 30 ộM CoCl2
40 ộM CoCl2 50 ộM CoCl2
Hình 4.4. Ảnh hưởng của CoCl2 ựến sự hình thành hoa của giống Nhung đà Bắc Hịa Bình (sau 60 ngày theo dõi)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 66
4.6. Tìm hiểu ảnh hưởng của chồi ựơn và cụm chồi ựến quá trình ra hoa in vitro