Chuẩn bị dụng cụ:
- Bơm tiêm vô trùng 1ml
- Bơm tiêm Hamilton 10µl vô trùng - Dao mổ, kéo, panh
- Bàn cốđịnh chuột phủ toan vô trùng - Băng dính cốđịnh - Tampon vô trùng - Gạc vô trùng Chuẩn bị hóa chất: - Ketamin (Imagene) - Xylastin (Rampoun) - Nước muối sinh lý. - Betadine
Chuẩn bị chuột thí nghiệm:
- Chuột trưởng thành
Quy trình gây mê chuột
- Pha 0.9ml Ketamin (Imagene) và 0.2% Xylastin (Rampoun) trong 3.8ml nước muối sinh lý.
- Tiêm vào khoang màng bụng của chuột nhắt trắng trưởng thành với hàm lượng 1ml/20mg trọng lượng.
- Thời gian tác dụng ước tính trong vòng 30 phút.
Quy trình ghép tế bào trên mô hình chuột trưởng thành:
- Sau khi gây mê, chuột nhắt được cốđịnh trên bàn mổđã chuẩn bị sẵn - Đặt chuột nằm ngửa, cố định bốn chân chuột xuống bàn mổ bằng băng
dính cốđịnh. Sát trùng vùng bụng
- Mở bụng chuột vùng dưới hạ sườn theo đường mổ ngang - Bộc lộ vùng ổ bụng, và vùng gan chuột.
- Dùng gạc mềm làm ẩm bằng nươc muối sinh lý phủ lên vùng ruột - Cặp tại cuống gan. Cắt 40% gan ở thùy phải. Khâu cầm máu - Bộc lộ vùng tĩnh mạch cửa.
- Tế bào đã được đánh dấu được chuẩn bị trong bơm tiêm 1ml, nối với catheter 29G. Đặt catheter vào tĩnh mạch cửa, bơm chậm tế bào trong vòng 10 phút. Nồng độ tế bào ước tính 8x105 tế bào trong 300µl nước muối sinh lý vô trùng.
- Rút catheter, cầm máu bằng tampon. - Đóng bụng chuột.
- Sát trùng vết mổ
- Đặt chuột trở lại lồng. Làm ấm chuột dưới bóng đèn 60W cho đến khi hồi tỉnh
- Đánh giấu lồng và bắt đầu theo dõi hết 5 ngày sau mổ.
Quy trình ghép tế bào trên mô hình chuột sơ sinh:
- Chuột sơ sinh 3-5 ngày sau đẻđược tiêm tế bào trực tiếp không cần gây mê
- Bộc lộ vùng lách của chuột. (Nhìn thấy dưới da)
- Chuẩn bị tế bào trong bơm tiêm Halminton 10µl qua đường dưới da. - Bơm tế bào vào vùng lách qua da, tránh tiêm tế bào vào ổ bụng. Nồng
độ tế bào ước tính 4x105 tế bào trong 300µl nước muối sinh lý vô trùng. - Sau khi tiêm, đặt chuột vào lồng riêng. Làm ấm dưới bóng đèn 60W. - Bắt đầu theo dõi chuột sau khi tiêm cho đến hết 5 ngày sau tiêm.