2.1.3.1. Đối tƣợng nghiên cứu
2.1.1.3.1.1. Nguyên liệu
Thân rễ và rễ củ sâm Việt Nam tươi hơn 6 tuổi .
Hình 2.1.Hình 3.1. Thân rễ và rể củ sâm Việt nam
2.1.2.3.1.2. Dung môi, hóa chất
Dung môi
- Methanol, cloroform PA (Trung Quốc)
- Acetonitril, methanol HPLC (LiChrosolv – Merck) - Aceton công nghiệp.
Hóa chất
- Chất chuẩn: Các ginsenosid chuẩn: G-Rb1, G-Rd, G-Rg1, M-R2 do ban Nghiên cứu khoa học-Khoa Dược Đại học Y Dược TPHCM cung cấp.
- Resin pha đảo Diaion HP-20 (styren divinylcopolymer resin) (Mitsubishi, Nhật Bản).
- Bản mỏng tráng sẳn silicagel F254 (Merck) - Thuốc thử: Acid sulfuric 10%/cồn, vanillin-sulfuric.
- Nồi hấp tiệt trùng hiệu HIRAYAMA.
Formatted: Bullets and Numbering
- Tủ sấy Gallenkamp (Anh) - Tủ sấy chân không Shellab (Mỹ) - Máy cô quay Buchi (Nhật Bản) - Thiết bị chiết Soxhlet
- Máy cất nước Aquatron
- Cột sắc ký có chiều dài 40 cm, đường kính 3,5 cm. - Bồn siêu âm Sonorex Bandeline (Pháp)
- Cân phân tích Libror AEL - 40SM (Shimadzu - Nhật Bản) - Máy HPLC (LC-10AD – Shimadzu - Nhật Bản)
- (LC-8 - - )
- Máy HPLC Water.
2.2.3.2. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.2.1.3.2.1. Khảo sát dược liệu tươi
- Mô tả: Đặc điểm hình thái - Xác định độ ẩm
- Định tính bằng sắc ký lớp mỏng.
2.2.2.3.2.2. Chế biến sâm Việt Nam từ sâm Việt Nam tươi
Thân củ và rễ củ sâm Việt Nam sau khi rửa sạch được đánh mã số và chia thành các phần như sau:
- Sâm tươi ngâm trong dung dịch ethanol (mẫu lưu).
- Sâm khô chưa chế biến: Sấy sâm tươi ở nhiệt độ 50 ºC đến khi đạt độ ẩm qui định cho dược liệu khô theo tiêu chuẩn của DĐVN III (không quá 13%).
- Sâm Việt Nam sau khi chế biến: Chia thành 4 phần, Hhấp sâm tươi ở nhiệt độ 105ºC kể từ khi nước sôi, lần lượt lấy từng phần sâm trong khoảng thời gian 2, 4, 6, 8 giờ; sau đó sấy ở nhiệt độ 50 ºC đến khi đạt độ ẩm qui định cho dược liệu khô theo DĐVN III (không quá 13%).
2.2.3.3.2.3. Chiết xuất cao toàn phần
Formatted: Bullets and Numbering
Formatted: Bullets and Numbering
Cao toàn phần các mẫu sâm sâm chưa chế biến và sâm Việt Nam qua chế biến được chiết bằng thiết bị chiết Soxhlet với dung môi là methanol 100%.
2.2.4.3.2.4. Phân lập saponin toàn phần
Cao toàn phần được phân tách bằng cột pha đảo Diaion HP-20 với các dung môi rửa giải lần lượt là nước, methanol 100%, cloroform.
Dịch nước đem cô cách thủy thu cắn, các dịch methanol 100%, cloroform được cô quay thu hồi dung môi, cắn còn lại (cắn saponin toàn phần, cắn cloroform) đem sấy chân không đến khô.
. .
2.2.5.3.2.5. Tiến hành so sánh thành phần saponin trong các mẫu dược liệu.
So sánh thành phần saponin trong các mẫu sâm chưa chế biến và qua chế biến bằng sắc ký lớp mỏng và sắc ký lỏng hiệu năng cao.
1. : (isocratic hay gradient) . 3.2.6. . T thăm .
Formatted: Bullets and Numbering
Formatted: Bullets and Numbering
Formatted: Normal, Justified, Space Before: 6 pt, Line spacing: 1.5 lines
Formatted: Bullets and Numbering
Formatted: TIEU DE CAP 3, Indent: Left: 0", Hanging: 1"