1.2.2.1. Phân loại
Virus viêm gan vịt nằm trong họ Picornaviridae, họ này chứa hầu hết các loại virus gây hại cho ựộng vật. cách ựặt tên xuất phát từ tắnh chất nhỏ bé của virus (Pico).
Virus viêm gan vịt có 3 type: Type I: là một Enterovirus. Type II: là một Astrovirus. Type III: là một Picornavirus.
1.2.2.2. Hình thái
Virus viêm gan vịt là một ARN virus rất nhỏ, xuyên qua màng lọc Beckefeld và Seitz. Theo Reuss 1959[5], dưới kắnh hiển vi ựiện tử virus là những hạt tròn bề mặt sù sì, kắch thước từ 20-40nm. Virus thuộc loại không có vỏ bọc nên không mẫn cảm với Ete và Chloroform, do ựó người ta thường
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 22 dùng các chất sát trùng Formol 3%, NaOH 3%, nước vôi ựể diệt virus. Capxit của virus gồm 32 capsome hợp thành cấu trúc hình khối bao bọc lấy sợi ARN nằm cuộn tròn ở giữa. ựây là vật liệu di truyền và gây nhiễm của virus. Khi virus xâm nhập vào tế bào, virus thực hiện quá trình nhân lên trong tế bào bị nhiễm. chắnh ARN ựó lập tức tạo thành ARNm ựiều khiển sinh tổng hợp axit nucleic và protein của virus.
Virus có sức ựề kháng rất lớn với ựiều kiện ngoại cảnh, có khả năng tồn tại 10 tuần trong ựàn vịt bị nhiễm, hơn 37 ngày trong phân ẩm (Asplin, 1961). Trong ựiều kiện lạnh virus tồn tại rất lâu ở 2-40C, virus tồn tại ựược 700 ngày. Theo Schyusn 1957 khi làm lạnh ựến -380C thì giữ ựược từ 8 tháng trở lên. Virus bị vô hoạt bởi Formalin 1% và NaOH 2% ,vì vậy người ta thường dùng 2 chất sát trùng này ựể tiêu ựộc chuồng trại.
1.2.2.3. đặc tắnh gây bệnh và ựộc lực của virus
Trong tự nhiên virus viêm gan vịt gây bệnh cho vịt từ 1-3 tuần tuổi cũng có trường hợp phát ra từ vịt mới nở 12 giờ hoặc vịt lớn 5-6 tuần (Krivinka, Kozushik, 1962). Ngoài ra ngan cũng mắc bệnh viêm gan vịt ựặc biệt là ngan pháp, ngỗng và một số loài chim nước như vịt trời. vịt trưởng thành và một số gia cầm khác không mắc.
Về tắnh mẫn cảm theo ựộ tuổi với vịt con ựược Kapp và cộng sự năm 1967 ựã giải thắch như sau: ngay sau khi nở trong gan của vịt con có nhiều tế bào gan gọi là tế bào sáng (Light- Cell) và virus trước tiên tấn công vào tế bào gan tối (Dark- Cell). Số lượng các tế bào này ngày càng thay thế cho tế bào gan sáng thì tắnh mẫn cảm của virus ựối với vịt ngày càng giảm dần. thời gian chuyển hóa cấu trúc gan này khoảng 4-6 tuần hoàn toàn phù hợp với giới hạn tuổi mắc bệnh viêm gan vịt. còn những vịt từ 5-6 tuần tuổi hoặc lớn hơn vẫn bị mắc bệnh nặng ựược giải thắch: các tế bào gan bị tổn thất và các tế bào gan sáng lại chiếm ưu thế một lần nữa.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 23 Trong phòng thắ nghiệm dùng vịt con từ 1-7 ngày tuổi làm ựộng vật thắ nghiệm. các ựộng vật khác như thỏ, chuột lang, chuột bạchẦ ựều không mẫn cảm với bệnh. Ngoài ra virus còn gây nhiễm cho phôi vịt 10-14 ngày tuổi hoặc phôi gà 8-10 ngày tuổi, ở các hiệu giá khác nhau tuỳ thuộc vào ựộc lực của virus.
Virus viêm gan vịt cường ựộc khi cấy truyền trên vịt con thì ựộc lực tăng lên. Nhưng nếu cấy truyền nhiều ựời trên phôi gà, phôi vịt thì ựộc lực giảm ựi không còn khả năng gây bệnh trở thành giống virus nhược ựộc. cụ thể là virus Type I và Type II cấy truyền nhiều ựời qua phôi gà, virus Type III cấy truyền nhiều ựời qua phôi vịt. trong thiên nhiên có một số chủng virus viêm gan vịt có ựộc lực yếu, nó có thể không gây chết phôi ở những lần cấy truyền ựầu tiên (Asplin, 1965) [22]
1.2.2.4. đặc tắnh nuôi cấy
Virus cường ựộc viêm gan vịt có trong tất cả các cơ quan, mô của vịt con mắc bệnh, tập trung nhiều nhất ở gan, lách, ựại não.
- Nuôi cấy trên ựộng vật cảm thụ
Virus viêm gan vịt cường ựộc phát triển tốt trên cơ thể vịt 1-7 ngày tuổi.Thỏ, chuột lang, chuột bạch, ngườiẦkhông mẫn cảm với virus viêm gan vịt (Reuss, 1959)[50]. Người ta dùng huyễn dịch chứa virus viêm gan vịt ựem tiêm dưới da, bắp thịt, cho uống, nhỏ mắt, nhỏ mũi, sau 2-4 ngày vịt có triệu chứng ựặc trưng. Mổ khám bệnh tắch ựiển hình ở gan, gan sưng nhũn, dễ bị nát khi ấn nhẹ, trên bề mặt có nhiều ựiểm xuất huyết, ựôi khi có ựiểm hoại tử vàng xen kẽ, lách sưng, có ựiểm hoại tử chấm trắng, thận bị xung huyết. Quan sát bệnh tắch vi thể thấy chủ yếu có biến ựổi ở gan. Trong tế bào gan có nhiều ựiểm hoại tử, tăng sinh ống mật, các mạch máu bị sưng, các tế bào gan bị tắch mỡ. một số trường hợp nguyên sinh chất tế bào gan xuất hiện thể bao hàm.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 24 Virus viêm gan vịt thắch ứng trên phôi vịt 10-14 ngày tuổi, phôi gà 8-10 ngày tuổi. nhiều tác giả ựã ứng dụng phương pháp này trong quá trình phân lập virus. Năm 1950 Levine và Fabricant, sau ựó Asplin, Lauchlan (1954), Rotr, Pini (1957), Reuss (1959)Ầựã sử dụng phương pháp này ựể phân lập virus dùng huyễn dịch các cơ quan, ựặc biệt là gan (sử lý bằng kháng sinh) rồi ựem tiêm vào xoang niệu môi của phôi gà từ 8-10 ngày tuổi hoặc phôi vịt 10- 14 ngày tuổi, ựể tủ ấm ở nhiệt ựộ 370C.
Phần lớn phôi gà chết sau 5-8 ngày còn phôi vịt sau 24-72 giờ. Phôi chết ựể nhiệt ựộ 40C sau 24 giờ ựem mổ và quan sát thấy bệnh tắch như sau:
* Xuất huyêt nặng dưới da, ựặc biệt là ở ựầu và tứ chi. * Phôi phù toàn thân nhất là cổ và ựầu.
* Gan sưng có nhiều ựiểm xuất huyết, trên bề mặt gan có những ựiểm hoại tử vàng.
* Nước trứng chuyển sang màu xanh nhạt.
Với những phôi có thời gian chết kéo dài thì nước trứng có màu xanh, gan tổn thương, phôi còi cọc biểu hiện rõ rệt hơn.
- Nuôi cấy trên môi trường tế bào
Nhiều thắ nghiệm nuôi cấy virus viêm gan vịt trên môi trường tế bào tổ chức ựã xác ựịnh virus nhân lên tốt trên môi trường tổ chức xơ phôi gà, xơ phôi vịt, thận phôi, gan phôi vịtẦsau khi gây nhiễm hàm lượng virus tăng lên và sau một vài lần cấy truyền trên môi trường tế bào virus cho CPE (Cytophatogen effect) nhất ựịnh. Biểu hiện của CPE là nhân bị co tròn, nguyên sinh chất ựông ựặc, không bào và nhân co lại, tế bào bị vỡ ra rồi chết, căn cứ vào ựó ta có thể ựánh giá hiệu giá virus.