CC, Silicagen; Aceton/CH 2Cl
Hình 3.5: Hình ảnh vi phẫu phiến lá ngón hoa vàng
3.3. XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT PHÂN LẬP TỪ LÁ CÂY NGÓN HOA TRẮNG (NHÀI BẮC)
hiện đại nhƣ phổ khối, phổ cộng hƣởng từ hạt nhân, phổ hồng ngoại.
Mặt khác các hợp chất phân lập đƣợc hầu hết đều là chất kết tinh, vì vậy các hợp chất này cũng đã đƣợc tiến hành xác định điểm nóng chảy, đây là kỹ thuật đơn giản nhanh chóng, cho phép sơ bộ định tính và đánh giá mức độ tinh khiết của hợp chất. Kỹ thuật này có ƣu điểm là sử dụng ít mẫu và không làm hao hụt mẫu.
3.3. XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT PHÂN LẬP TỪ LÁ CÂY NGÓN HOA TRẮNG (NHÀI BẮC) HOA TRẮNG (NHÀI BẮC)
Hợp chất HC1:
Hợp chất HC1 đƣợc phân lập dƣới dạng chất rắn màu trắng, nhiệt độ nóng chảy ở 85 - 86oC. Phổ 1H NMR (500 MHz, CHCl3)δH của chất này cho tín hiệu cộng hƣởng rất đặc trƣng của một hợp chất alcol mạch dài với một nhóm methyl dƣới dạng triplet [δH 0,87 (3H, t, J = 7,0 Hz, H-30], một nhóm methylen dƣới dạng quintet [δH 1,55 (2H, quin, J = 6,5 Hz, H-2)], một nhóm oximethylen dạng triplet [δH 3,63 (2H, t, J = 6,5 Hz, H-1)] và một tín hiệu dạng chồng chập lên nhau (overlap) với cƣờng độ rất lớn của 54 proton methylen khác. Phổ 13C NMR(125 MHz, CHCl3)δC của HC1 cũng rất đặc trƣng cho một hợp chất ancol mạch dài với tín hiệu cộng hƣởng của một cacbon thuộc nhóm methyl (δC 14,11), một nhóm oximetylen (δC 63,11) và các nhóm melhylen ở vùng trƣờng cao (δC 22,70-32,83).
Qua các dữ kiện phổ 1H NMR(500 MHz, CHCl3)δH và 13C NMR(125 MHz, CHCl3)δC trên có thể xác định HC1 là một hợp chất ancol mạch dài có công thức phân tử là C30H62O và tên gọi là 1-triacontanol hay tên IUPAC là: triacontan-1-ol. Đây là một hợp chất alcol khá phổ biến ở các loài thực vật bậc cao.
Hình 3.8: Phổ 1H-NMR (500 MHz, CHCl3)δH của hợp chất HC1
Hình 3.10: Cấu trúc hóa học của hợp chất 1-triacontanol (HC1)
Hợp chất HC2:
Hợp chất HC2 thu đƣợc dƣới dạng tinh thể dạng phiến, màu trắng, nhiệt độ nóng chảy ở 135-136oC. Phổ 1
H NMR(500 MHz, CHCl3)δH dễ dàng nhận thấy tín hiệu cộng hƣởng của một proton dạng olefin [δH 5,34 (1H, brd, J= 5,0 Hz, H-6) và của 6 nhóm methyl trong đó có 2 nhóm cộng hƣởng dƣới dạng singlet [δH 0,68 (3H, s, H-18) và 1,00 (3H, s, H-19)] và 4 nhóm cộng hƣởng dạng doublet [δH 0,81 (3H, d, J= 7,0 Hz, H-27); 0,83 (3H, d, J= 7,0 Hz, H-26); 0,85 (3H, d, J= 7,5 Hz, H-29); 0,92 (3H, d, J= 6,5 Hz, H-21)]. Tín hiệu cộng hƣởng của một nhóm hydroxymethin xuất hiện dƣới dạng multiplet [δH 3,52 (1H, m, H-3)]. Ngoài ra còn có tín hiệu cộng hƣởng của proton của các nhóm methin và methylen khác ở vùng trƣờng cao [δH 1,04-2,31].
Hình 3.12: Phổ 13C-NMR(125 MHz, CHCl3)δC của hợp chất HC2
Hình 3.13: Phổ DEPT của hợp chất HC2 Phổ 13
C NMR(125 MHz, CHCl3)δC của HC2 có tín hiệu cộng hƣởng của 29 nguyên tử cacbon thuộc về một liên kết [δC 121,73 (C-6); 140,77 (C-5)], 6 nhóm methyl [δC 11,87 (C-18); 11,99 (C-29), 18,79 (C-21); 19,05 (C-26); 19,40 (C-19); 19,82 (C-27)], 8 nhóm methin, 11 nhóm methylen và 2 cacbon bậc bốn. Kết hợp dữ
liệu phổ cộng hƣởng từ 1H NMR(500 MHz, CHCl3)δH và 13C NMR(125 MHz, CHCl3)δC cho thấy hợp chất HC2 có cấu trúc steroid.
Bảng 3.4: Dữ liệu phổ 1H NMR(500 MHz, CHCl3)δH và 13C NMR(125 MHz, CHCl3)δC của chất HC2 Vị trí C ppm H ppm (m, J = Hz) *C ppm *H ppm (m, J = Hz) 1 37,27 37,7 2 31,68 32,3 3 71,83 3,52 (1H, m) 71,8 3,56 (1H, m) 4 42,32 42,8 5 140,77 141,2 6 121,73 5,34 (1H, m) 122,1 5,39 (1H, m) 7 31,93 32,1 8 31,93 32,3 9 50,17 50,6 10 36,52 36,9 11 21,10 21,5 12 39,80 40,2 13 42,35 42,8 14 56,79 57,2 15 24,31 24,7 16 28,25 28,7 17 56,05 56,5 18 11,87 0,68 (3H, s) 12,4 0,72 (3H, s) 19 19,40 1,00 (3H, s) 19,8 1,05 (3H, s) 20 36,16 36,6 21 18,79 0,92 (3H, d, J= 6,5 Hz) 19,2 0,96 (3H, d, J = 6,5 Hz) 22 33,98 34,4 23 26,13 26,5 24 45,87 46,2 25 29,19 29,6
26 19,05 0,83 (3H, d, J= 7,0 Hz) 20,2 0,87 (3H, d, J = 6,7 Hz) 27 19,82 0,81 (3H, d, J= 7,0 Hz) 19,5 0,85 (3H, d, J = 6,7 Hz)
28 23,10 23,5
29 11,99 0,85 (3H, d, J= 7,5 Hz) 12,3 0,89 (3H, t, J = 7,4 Hz,
Dung môi đo phổ: CDCl3
*: độ dịch chuyển hóa học trong tài liệu tham khảo [43]
So sánh các dữ kiện phổ trên cùng với tham khảo tài liệu [43] cho phép xác định chất HC2 có công thức phân tử là C29H50O và có tên là β-sitosterol hay tên IUPAC là: 17-(5-ethyl-6-methylheptan-2-yl)-10,13-dimethyl-2, 3, 4, , 8, 9, 11, 12, 14, 15, 16, 17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol). β-sitosterol là sterol phổ biến nhất trong các loài thực vật bậc cao.
Hình 3.14: Cấu trúc hóa học của hợp chất β-sitosterol (HC2)
Hợp chất HC3:
Hợp chất HC3 đƣợc phân lập dƣới dạng tinh thể hình kim màu trắng, nhiệt độ nóng chảy ở 93 - 94oC. Phổ 1H NMR(500 MHz, CHCl3)δH của HC3 chỉ cho tín hiệu cộng hƣởng của 4 proton thuộc một vòng benzen thế 1,4 dƣới dạng 2 doublet [δH 6,71 (2H, t, J = 8,5 Hz, H-3 và H-5); và 7,04 (2H, t, J = 8,5 Hz, H-2 và H-6)] 2 nhóm methylen dƣới dạng triplet [δH 2,73 (2H, t, J = 7,0 Hz, H-7); 3,70 (2H, t, J =
7,0 Hz, H-8)]. Độ chuyển dịch hóa học của một nhóm methylen chuyển dịch về phía trƣờng thấp hơn (δH 3,70) cho biết nó liên kết trực tiếp với một nguyên tố có độ âm điện lớn là oxi. Phổ 13
C-NMR(125 MHz, CHCl3)δC của HC3 chỉ có tín hiệu cộng hƣởng của 8 carbon, trong đó có tín hiệu của một nhóm methylen [δC 39,38 (C-7)] và một nhóm oximethylen [δC 64,71 (C-8)]; một vòng benzen thế 1,4 [δC
116,27 (C-3 và C-5); 130,86 (C-2 và C-6); và 2 carbon bậc 4 là 131,03 (C-1); 156,72 (C-4)]. Phổ khối ESI-MS cho pic ion giả phân tử tại m/z 137 từ đó suy ra HC3 có khối lƣợng phân tử là 138.
Kết hợp các dữ kiện phổ trên và [36] đã xác định đƣợc công thức phân tử của chất HC3 là C8H10O2 và có tên IUPAC là (4-(2-hydroxyethyl)phenol) hay còn gọi là tyrosol. Bảng 3.5: Dữ liệu phổ 1H NMR (500 MHz, CHCl3)δH và 13C NMR (125 MHz, CHCl3)δC của chất HC3 Vị trí C ppm H ppm (m, J = Hz) 1 131,03 - 2 130,86 7,04 (2H, t, J = 8,5 Hz) 3 116,27 6,71 (1H, t, J = 8,5 Hz) 4 156,72 - 5 116,27 6,71 (1H, t, J = 8,5 Hz) 6 130,86 7,04 (2H, t, J = 8,5 Hz) 7 39,38 2,73 (2H, t, J = 7,0 Hz) 8 64,71 3,70 (2H, t, J = 7,0 Hz)
Dung môi đo phổ: CD3OD
Hình 3.16: Phổ 13C-NMR(125 MHz, CHCl3)δC của hợp chất HC3
Hình 3.17: Cấu trúc hóa học của hợp chất tyrosol (HC3)
Nhận xét:
Ba hợp chất phân lập đƣợc từ lá cây ngón hoa trắng 1-triacontanol, β- sitosterol, tyrosol tƣơng đối phổ biến ở các cây thực vật bậc cao, nhƣng đây là lần đầu tiên phân lập đƣợc từ lá cây ngón hoa trắng (Nhài bắc).