Thời gian tuần hoàn trong máu của liposom được đánh giá thông qua nồng độ doxorubicin toàn phần trong huyết tương. Doxorubicin trong huyết tương được chiết theo quy trình mô tả ở mục 2.3.3.3 và được đo huỳnh quang ở bước sóng kích thích 471 nm, bước sóng phát xạ 554 nm. Từ mật độ huỳnh quang thu được, nồng độ tương đương doxorubicin được xác định dựa vào đường chuẩn xây dựng từ các dung dịch chuẩn doxorubicin đã biết trước nồng độ.
3.1.3.1. Kết quả xây dựng đường chuẩn doxorubicin
Pha các dung dịch doxorubicin hydroclorid có nồng độ 0,25; 0.5; 1,0; 2,5; 5; 10 µg/ml. 100 µl các dung dịch trên được thêm vào 2,4 ml dung dịch isopropanol acid hóa. Tiến hành đo huỳnh quang với bước sóng kích thích 471 nm, bước sóng phát xạ 554 nm. Kết quả thu được được thể hiện trong bảng 3.5.
Bảng 3.5. Sự phụ thuộc của mật độ huỳnh quang vào nồng độ dung dịch doxorubicin hydroclorid
Nồng độ
DOX (µg/ml) 0,01 0,02 0,04 0,1 0,2 0,4
Mật độ
huỳnh quang 0,485 1,743 4,273 11,247 24,865 45,171
Từ các kết quả trên, chúng tôi dựng đồ thị thể hiện sự tương quan giữa mật độ huỳnh quang và nồng độ DOX. Đồ thị được biểu diễn trong hình 3.2.
Hình 3.2. Đồ thị biểu diễn tương quan giữa mật độ huỳnh quang và nồng độ doxorubicin hydroclorid
Nhận xét:
Đồ thị cho thấy sự tương quan cao giữa nồng độ DOX và mật độ huỳnh quang. Do vậy có thể sử dụng phương pháp đo quang phổ huỳnh quang để định lượng doxorubicin trong dịch chiết.
3.1.3.2. Khảo sát nồng độ doxorubicin trong huyết tương
Nồng độ doxorubicin trong huyết tương chuột nhắt được định lượng và so sánh giữa 3 nhóm: nhóm tiêm thuốc doxorubicin tự do (F-DOX), nhóm tiêm liposom doxorubicin
không gắn PEG (CL-DOX) và nhóm tiêm liposom doxorubicin gắn PEG (SSL-DOX) với liều 10 mg/kg. Kết quả được thể hiện trong bảng 3.6 và hình 3.3.
Bảng 3.6. Nồng độ tương đương doxorubicin trong huyết tương chuột nhắt tại các thời điểm 5 phút, 4 giờ và 24 giờ sau khi tiêm tĩnh mạch đuôi
Thời điểm (giờ)
Nồng độ tương đương doxorubicin trung bình (µg/ml huyết tương) ± SD
p
(giờ) F-DOX (1) CL-DOX (2) SSL-DOX (3)
0,083 13,79 ± 1,33 133,73 ± 10,98 152,49 ± 14,06 p2-1 < 0,05 p3-1 < 0,05 p3-2 > 0,05 4 5,09 ± 1,98 64,24 ± 5,42 112,06 ± 8,41 p2-1 < 0,05 p3-1 < 0,05 p3-2 < 0,05 24 - 8,64 ± 0,56 51,61 ± 3,51 p3-2 < 0,05
(- : Không phát hiện được.)
Hình 3.3. Nồng độ tương đương doxorubicin trong huyết tương chuột nhắt tại thời điểm 5 phút, 4 giờ, 24 giờ sau khi tiêm tĩnh mạch đuôi
Nhận xét:
Tại thời điểm 5 phút, nồng độ tương đương doxorubicin của dạng doxorubicin tự do thấp hơn khoảng 9 - 10 lần so với dạng liposom. Ở thời điểm 4 giờ, nồng độ tương doxorubicin còn lại khá thấp và đến thời điểm 24 giờ thì không phát hiện được. Nồng độ tương đương doxorubicin tại thời điểm 5 phút với 2 chế phẩm liposom có chênh lệch một chút, tuy nhiên sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê (p>0,05). Sự chênh lệch tăng lên theo thời gian. Cụ thể, nồng độ tương đương doxorubicin tại thời điểm 4 giờ khi dùng PEG-liposom doxorubicin cao hơn gấp khoảng 2 lần so với dạng liposom không gắn PEG và đến 24 giờ sự chênh lệch này lên tới gần 6 lần.
Từ nồng độ tương đương doxorubicin trong máu, AUC0-24h được tính theo công thức (2) như trình bày ở mục 2.3.3.5. Kết quả được thể hiện trong bảng 3.7.
Bảng 3.7. Giá trị AUC0-24h của các dạng thuốc doxorubicin trên chuột nhắt (tiêm tĩnh mạch đuôi, liều 10 mg/kg)
Dạng thuốc DOX tự do Liposom DOX PEG-liposom DOX
AUC0-24h
(µg.h/ml) 87,88 1116,52 2154,82
Nhận xét:
Giá trị AUC0-24h với liều tiêm tĩnh mạch 10 mg/kg của PEG-liposom doxorubicin là cao nhất, gấp khoảng 1,9 lần so với dạng liposom doxorubicin không gắn PEG và khoảng 24,5 lần so với dạng doxorubicin tự do.
Như vậy, từ các kết quả trong bảng 3.6 và 3.7, có thể kết luận sơ bộ là gắn PEG lên bề mặt liposom có khả năng làm tăng thời gian tuần hoàn của liposom trong máu.
3.2. Bàn luận